叶绿素检测作业指导书.doc

叶绿素检测作业指导书 1.试剂 1.1碳酸镁悬浮液：称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100ml蒸馏水中。每次使用 时，要充分摇匀。 1.2丙酮溶液：在900ml丙酮中加100ml蒸馏水。 1.3盐酸溶液：量取83ml盐酸溶于水中，冷却并稀释至1000ml。 2.测定步骤 2.1浓缩：在一定量的试样中添加0.2ml碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm的微孔滤膜吸滤。过滤器内无水分后，还要继续抽吸几分钟。如果要延时提取，可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。 2.2提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入3ml丙酮溶液至滤纸浸湿的程度， 把滤膜研碎，再少量地加90%的丙酮溶液，把滤膜完全研碎，然后用90%丙酮溶液将已磨碎的滤膜和丙酮溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过6ml，盖上管塞，置于4℃的暗处浸泡24h。 2.3离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。将上清液移入标定过的10ml具塞刻度管中，加少量90%丙酮溶液于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。此操作重复2~3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10ml。 2.4测定：取上清液于10mm或50mm的比色池中，以90%丙酮溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630nm的吸光度。选择比色池的光程长度或稀释度，使其光密度OD