正交法对柠檬酸发酵优化.pptVIP

发酵液→过滤（除去菌体）→粗提（根据产物的不同物理性质或化学性质，使用不同的方法）→精制（脱色，除去微量杂质，水份，干燥等）→成品。 后提取的流程图： 酸解及H2SO4用量计算： Ca3 (C6 H5 O7 )2·4H2 O +3H2 SO4 +4H2 O → 2C 6 H8 O7·H2O+3CaSO4·2H2 O↓ 2C6H8 O7·H2O —— 3CaCO3 —— 3H2SO4 2×210（g） 3×100（g） 3×98（g） 14（g） 10（g） 9.8（g） （5.3 ml98% H2 SO4） 本实验采用沉淀法对发酵液中的柠檬酸进行提取，经过中和、酸解、脱色、过滤、离子交换、浓缩、结晶和干燥的方法，得到柠檬酸提取物。 实验说明 发酵液→过滤除去菌体→测定含酸量（g/100 ml发酵液）→中和（加CaCO3 ）→过滤（固液分离，保留固相）→固相加水调浆，加H2SO4酸解→加活性C脱色→过滤→ 离子交换→真空浓缩→结晶。 实验步骤 1、称取CaCO3，加入到70℃的柠檬酸发酵液中注意勿使泡沫溢出，至无气泡产生为止，pH6.5。 2、趁热过滤收集柠檬酸钙沉淀。 3、滤饼放入烧杯中调成浓浆状 实验步骤 4、加硫酸酸解，酸解后， pH值为2左右 5、加入活性碳，保温脱色，并冷却 6、酸解液真空抽滤，收集滤液 7、过离子交换树脂 8、酸解液真空浓缩 9、常温下结晶。 10、在 30 ～35℃下烘干，称重。 11、计算提取率 提取率(%)=烘干后的柠檬酸重量 / 发酵液所含的柠檬酸量 ×100 有机酸发酵优化 正交法对柠檬酸发酵培养基及条件优化 060516211 杨兴旭 有机酸发酵 柠檬酸简介 正交实验法优化柠檬酸发酵条件 柠檬酸的发酵 柠檬酸的提取 柠檬酸简介 柠檬酸生产介绍 柠檬酸又名枸橼酸，它是存在于柠檬等水果中的一种有机酸。学名为3-羟基3-羧基戊二酸。 柠檬酸具有令人愉快的酸味，它入口爽快，无后酸味，安全无毒，是发酵法生产的最重要有机酸。它在水中的溶解度极高，能被生物体直接吸收代谢。它的许多特殊优点使它在各个工业部门得到了广泛的应用。柠檬酸的盐类和衍生物也各具优点，用途广泛，在国民经济中占有重要地位。 柠檬酸可由曲霉菌发酵糖类而生成，其中尤以黑曲霉产酸能力最强。目前工业生产中多以黑曲霉为柠檬酸产生菌。 黑曲霉耐酸性较强，在pH值1.6时仍能良好生长。利用其产酸高、耐酸强的生理特征，使用pH1.6的酸性营养滤纸分离该菌，简单易行，再加上用变色圈法进行初筛，使产柠檬酸的菌株更易被选出。 黑曲霉产生的柠檬酸,可利用Deniges氏液鉴别；其产酸量可用0.1N氢氧化钠滴定。 1、合适的碳源（淀粉、麦芽糖、甘露糖等），高浓度的糖； 2、限制有机氮源、选择适量的无机氮源（铵盐）； 孢子培养基 ：要求能使菌体迅速生长，产生较多优质的孢子，所以营养不要太丰富； 发酵培养基 ：既要使菌体能迅速生长，达到一定的菌丝浓度，又要使长好的菌体能迅速合成所需产物 ； 3、合适的pH值，黑曲霉在pH为2～3的环境中发酵糖，产物以柠檬酸为主；当pH接近中性时则大量产生草酸， 而柠檬酸产量很低； 4、发酵液中溶氧量要高（摇床的转速250r/m）； 5、限制重金属离子，如Mn2＋缺乏促进EMP途径畅通， 控制Fe2＋含量使顺乌头酸酶活力降低，使柠檬酸积累 。 1. 将各菌种的孢子接种蔗糖培养基中，同时作对照实验 2.将实验组和对照组摇瓶振荡发酵培养 3.发酵结束后，测定并计算出空白对照和各菌种的平均产酸率 4.选取产酸率高且稳定的菌株 实验步骤 应用正交法优选柠檬酸最佳发酵条件 正交设计是利用一套规格化的表格—正交表，科学合理地安排试验。这种设计的特点是在试验的全部处理组合中，仅挑选部分有代表性的水平组合进行试验。通过这部分试验了解全面试验情况，找到较优的水平组合。 正交表是正交设计的基本工具。在正交设计中，安排试验，分析结果，均在正交表上进行。 实验原理 正交试验法：是利用正交表挑选出一部分有代表性的试验，所以减少了试验次数，另外用其进行整体设计，可以同时做一批试验以缩短试验周期，用该法通过极差分析、方差分析，还能告诉我们那些因素是试验指标的主、次因素，因素间有交互作用及交互作用的大小，分析出试验的误差大小，对所做试验的误差大小等有个数量的概念。 1.确定试验因素和水平数 根据试验的目的确定试验要研究的因素。为提高柠檬酸产生菌的产酸率， 据资料查阅或经验，常用的柠檬酸发酵培养基为：蔗糖15