第四章蛋白质的共价结构.pptVIP

—、蛋白质通论 (三)蛋白质构象和蛋白质结构的组织层次 (四)蛋白质功能的多样性 三、蛋白质一级结构的测定 (一)蛋白质测序的策略 1.确定蛋白质的纯度在97%以上。 2.测定多肽链的数目。 3.拆分多肽链。 4.分析每一条多肽链的氨基酸组成。 5.鉴定多肽链的N—末端和C—末端氨基酸残基。 6.用两种以上方法裂解多肽链成较小的肽段。 7.测定各肽段的氨基酸序列。 8.拼接各肽段成完整的多肽链。 9.确定二硫键的位置。 （十）蛋白质序列数据库 1.欧洲生物信息中心研究所和瑞士生物信息研究所共同管理的SWISS-PROT有10多万条肽链的信息； 2.美国国家生物医学基金会主持的PIR有近30万条肽链的信息，但多数由核酸信息翻译而来，有些未经严格检验。 3.美国政府支持的Gen Bank和欧洲的 EMBL有大量的基因序列信息，从其阅读框可以得到蛋白质序列的不少信息。 五、肽与蛋白质的人工合成 （一）肽的人工合成 羟胺断裂法：断裂Asn-Gly之间的肽键，但专一性不强，也可以断裂Asn-Leu和Asn-Ala之间的键. 1.Edman化学降解法: 用此原理已制成蛋白质序列分析仪。若每次循环的准确度为99%，经60次循环，准确度为：0.9960=0.54 (六)肽段氨基酸序列的测定 2.降解法：可用氨肽酶和羧肽酶，只能测出末端的几个氨基酸。羧肽酶Y可作用于任何氨基酸，有可能以此为基础开发出新的氨基酸的顺序测定仪。 3.根据核苷酸序列推定法：分离mRNA，经反转录测定cDNA的核苷酸序列, 再用遗传密码推定氨基酸序列。 4.质谱法：可分析微量的肽链，短肽在第一台质谱仪中经电喷射电离，按荷质比分离，依次在经碰撞池被裂解成离子碎片，在第二台质谱仪中测出各个离子碎片的谱线，推算出短肽的氨基酸序列。在蛋白质组学中应用广泛，但不能区分亮氨酸和异亮氨酸。 (七)肽段在多肽链中次序的决定肽段 (八)二硫桥位置的确定 用对角线电泳法 ? (九)蛋白质测序举例（胰岛素的序列测定） 四、蛋白质的氨基酸序列与生物功能 （一） 同源蛋白质的物种差异与生物进化 细胞色素C的物种差异 （二）同源蛋白质具有共同的进化起源 1.血红素蛋白与肌红蛋白 3. 一些功能差异很大的蛋白质:如溶菌酶和α-乳清蛋白功能差异很大,但有序列同源性。蛋白质家族的形成可能有趋同进化和趋异进化两种机制。 2. 丝氨酸蛋白酶类:显示明显的序列同源性。 （三）血液凝固与氨基酸序列的局部断裂 1.血液凝固中的级联过程 12中蛋白质凝血因子有7种是丝氨酸蛋白酶 * * * * * * * 与Ca2+结合促进凝血酶原与血小板膜结合，起始凝血酶原的激活 带净负电荷 * 第4章 蛋白质的共价结构 (一)蛋白质的化学组成和分类 蛋白质的元素组成：C、H、O、N、S,其中含N平均为16%，这一数据可用于蛋白质的含量测定。 1.简单蛋白 完全由氨基酸组成，不含非蛋白成分。 根据溶解性的不同，可将简单蛋白分为7类：清蛋白（溶于水）、球蛋白（溶于稀盐溶液）、谷蛋白（溶于稀酸或稀碱）、醇溶蛋白（溶于70%-80%的乙醇）、组蛋白（溶于水或稀酸，可用稀氨水沉淀）、精蛋白（溶于水或稀酸，不溶于氨水）和硬蛋白（只能溶于强酸）。 2.结合蛋白 由蛋白质和非蛋白成分组成，后者称为辅基。根据辅基的不同，可将结合蛋白分为以下7类： 核蛋白、脂蛋白、糖蛋白、磷蛋白、血红素蛋白、黄素蛋白和金属蛋白。 3.按蛋白质的生物学功能分类 （1）催化功能 生物体内的酶都是由蛋白质构成的，没有酶，生物体内的各种化学反应就无法正常进行。 （2）结构功能 蛋白质可以作为生物体的结构成分。高等动物的胶原蛋白是主要的细胞外结构蛋白，占蛋白总量的1/4；细胞膜、线粒体、叶绿体和内质网等膜系统都是由蛋白质与脂类组成的；动物的毛发和指甲都是由角蛋白构成的。 （3）运输功能 脊椎动物的血红蛋白和无脊椎动物的血蓝蛋白起着运输氧气的作用；血液中的载脂蛋白可运输脂肪，转铁蛋白可转运铁；一些脂溶性激素的运输也需要蛋白，如甲状腺素要与甲状腺素结合球蛋白结合才能在血液中运输。 （4）贮存功能 某些蛋白质的作用是贮存氨基酸作为生物体的养料和胚胎或幼儿生长发育的原料。此类蛋白质包括蛋类中的卵清蛋白、奶类中的酪蛋白和小麦种子中的麦醇溶蛋白等。肝脏中的铁蛋白可将血液中多余的铁储存起来，供缺铁时使用。 （5）运动功能 肌肉中的肌球蛋白和肌动蛋白是运动系统的必要成分，它们构象的改变引起肌肉的收缩，带动机体运动。细菌中