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细菌的翻译起始 真核生物翻译的起始 真核细胞的mRNA通过5’帽子吸引核糖体； 核糖体从mRNA的5’端向3’端“扫描”而找到起始密码子； 起始位点的Kozak共有序列： 5’-CCPuCCAUGG-3’； 翻译起始因子使真核mRNA保持环状。 真核生物的翻译起始 翻译起始因子使真核mRNA形成环状结构 核糖体小亚基通过“扫描”识别起始AUG 翻译的延伸过程 翻译的延伸过程由三个步骤组成：进位、成肽、转位，合称核糖体循环。 进位：正确的氨基酰tRNA置于A位点上； 成肽：A位点的氨基酰tRNA和P位点的肽酰tRNA的肽链间形成肽键，此反应导致多肽链从P位点转移到A位点上； 转位：新形成的A位点的肽酰tRNA转移到P位点。 以上机制在原核和真核生物中是高度保守的。 多肽链是由开放阅读框决定的 蛋白质合成的信息蕴藏在三核苷酸密码子中，每个密码子决定一个氨基酸。每条mRNA的蛋白质编码区由连续的、不重叠的、称为开放阅读框（open reading frame，ORF）的密码子串联组成。 每个ORF对应一个蛋白质，其起始和终止位点都位于mRNA内部。 ORF以AUG为起点，以UAA、UGA、UAG为终点。 小鼠?-珠蛋白基因 信使RNA的结构特点 mRNA至少应包括一个ORF。 真核细胞的mRNA几乎都只有一个ORF。 原核细胞的mRNA经常含有多个ORF，可编码多条多肽链。这种含有多个ORF的mRNA称为多顺反子。多顺反子经常编码功能相关的蛋白质。 原核mRNA具有核糖体结合位点（RBS）或称SD序列，用于募集翻译机器。 真核mRNA在5’和3’端修饰，以促进翻译。 原核与真核mRNA的结构 遗传密码的特点 从原核生物到人类都使用同一套密码：通用性（universal），有例外 密码子的排列具有方向性（direction） ：5’?3’ 三联体密码的连续性（commaless） 遗传密码具有简并性（degeneracy） ：多个密码子编码同一个氨基酸 反密码子与密码子的配对具有摆动性（wobble） 遗传密码的方向性和连续性 遗传密码的通用性 遗传密码的简并性 遗传密码的摆动性 tRNA是氨基酸的转运工具 细菌中有30～40种tRNA分子，真核生物有50种。 tRNA的CCA-3’序列是氨基酸结合部位，每一种特异的tRNA只能结合一种氨基酸，这种特异性是由氨基酰-tRNA合成酶决定的。 氨基酰-tRNA合成酶催化氨基酸结合到tRNA的受体臂上，该过程称为tRNA的负载。 核糖体是蛋白质合成的场所 核糖体RNA是核糖体的结构与催化决定因子 近年来对细菌核糖体的高精度三维结构的研究，加快了对这一分子机器的认识。 已经证明，大亚基的肽酰转移酶中心完全由RNA组成。 RNA也在小亚基扮演中心角色：负载tRNA的反密码子环和mRNA的密码子都是和16S rRNA相互作用，而不是小亚基的蛋白质。 实际上，现代核糖体很可能是从完全由RNA组成的原始翻译机器进化而来的。 核糖体有3个tRNA结合位点 核糖体有3个tRNA结合位点，即A、P和E位点。 A位点是氨基酰tRNA的结合位点，P位点是肽酰tRNA的结合位点，E位点是延伸的多肽链转移到氨基酰tRNA后释放的tRNA结合位点。 翻译机器还需要其他成分 20种氨基酸（AA） 酶及众多蛋白因子，如起始因子（initiation factor，IF)） 、延长因子（elongation factor，EF）、释放因子（release factor，RF）。 ATP、GTP 无机离子（Mg2+） 以E.coli 翻译为例，总结翻译所需的物质 小 结 mRNA的开放阅读框（蛋白编码区）的三联密码子决定了蛋白质氨基酸的排列顺序。 密码子是通用、5’-3’方向、连续和简并的，密码子和反密码子之间的识别有摆动性。 细菌mRNA的SD序列、真核mRNA的帽子和尾巴在翻译中起关键作用。 氨基酰-tRNA合成酶负责tRNA的负载。 核糖体有A、P、E三个tRNA结合位点。 翻译需要蛋白因子的参与，包括IF、EF和RF。 tRNA的负载 2 氨基酰-tRNA合成酶分两步使tRNA负载 连接了氨基酸的tRNA分子称为负载的tRNA。 负载的过程是氨基酸的羧基与tRNA受体臂末端的A的2’或3’-OH形成酰基。 形成的酰基有一个高能键。 细胞内存在20种氨基酰-tRNA合成酶，分别对应20种氨基酸。 负载分两步：（1）腺苷酰基化，氨基酸与ATP反应形成氨基酰-腺苷酸，释放PPi； （2）tRNA负载：氨基酰-腺苷酸（仍然与氨基酰-tRNA合成酶紧密结合）与tRNA结合。 氨基酰tRNA的写法： aa-tRNAaa，如： Met-tRNAMet