DEAE纤维素离子交换层析纯化血清白蛋白.pptVIP

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2019-09-02 发布于江苏
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DEAE纤维素离子交换层析纯化血清白蛋白.ppt

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DEAE纤维素离子交换层析纯化血清白蛋白;蛋白质的分离纯化;实验目的;实验内容;第一部分;本次实验目的;根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法。以离子交换剂为固定相，特定的离子溶液为流动相，依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同进行分离纯化的层析方式。 ;;离子交换剂 ;离子交换剂的选择;cation;起始缓冲液的选择;洗脱液 ;人血浆蛋白质的等电点及分子量 ;实验原理;材料与试剂;实验步骤;2、DEAE—纤维素层析纯化白蛋白 1）上样：将4ml 用缓冲液稀释后的血清样品加入上述已平衡好的层析柱表面，使样品进入柱床内。小心用4ml 0.06mol/L NH4Ac缓冲液洗涤沾在管壁上的蛋白质样品，使其进入床内。 2）穿流峰的洗脱：连接层析系统，继续用0.06mol/LNH4Ac缓冲液（pH6.5）洗脱未吸附到层析柱上的蛋白，直到记录仪基线基本恢复到原始位置。然后将柱中的缓冲液面降至与柱床表面平齐。 3）白蛋白的纯化：改用0.3mol/LNH4Ac缓冲液（pH6.5）洗脱。每管1ml分部收集 (调节部分收集器时间为1min/tube)。合并蛋白质浓度高的2-3管，用于后续蛋白质纯度鉴定。由于纯化的白蛋白仍然结合有少量胆色素等物质，收集的蛋白质为肉眼可见的浅黄色液体。 4）再生平衡：改用 1.5mol/LNaCl—0.3mol/LNH4Ac缓冲液洗脱，至记录仪基线基本恢复到原始位置后，再用40ml 0.06mol/LNH4Ac（pH 6.5）洗脱平衡即可。;Sample diagram of a gel filtration system with gravity feed. The safety loop is designed to keep the column from running dry if left unattended. ;BSZ-100自动部份收集器结构与使用方法 ;HD-3紫外检测仪使用方法 ;LM17型记录仪使用说明 ;记录紫外检测仪所显示的峰值，在洗脱曲线上标示出所更换的溶液、峰值及各个峰的含义，分析实验结果绘制实验装置图 ;下周实验