发酵——基因工程菌.pptVIP

第八章 基因工程菌培养;细胞因子、疫苗、酶;二、宿主-载体系统 ;1、大肠杆菌;大肠杆菌作为宿主的主要问题是 大肠杆菌分泌(secretion)的蛋白通常在细胞内，当这些蛋白达到高浓度时，会被水解或形成不溶的包含体。包含体蛋白是不折叠的，必须重新溶解并使它复性。 大量的外源蛋白会触发热冲击响应。增加蛋白水解酶的活性。此时，蛋白水解酶使蛋白的降解速率几乎等于产生的速率。 翻译常从甲硫氨酸的AUG密码子开始，故目的蛋白质N端常多一个甲硫氨酸残基，引起免疫反应。;真核基因在大肠杆菌中的表达方式 （1）以融合蛋白的形式表达药物基因：融合蛋白氨基端是原核序列，羧基端是真核序列。 优点：操作简便，蛋白质在菌体内比较稳定；易高效表达；但只能做抗原。 不做人体注射用药。 （2）以非融合蛋白的形式表达药物基因：易被蛋白酶破坏；N端有甲硫氨酸，易引起免疫反应。 （3）分泌型表达蛋白药物基因：外源基因融合到原核蛋白信号肽序列的下游。;2、G+细菌;3、低等真核细胞;影响目的基因在酵母菌中表达的因素 （1）外源基因拷贝数：高度稳定、高拷贝 （2）外源基因的表达效率：启动子 （3）外源蛋白的糖基化： （4）宿主菌珠的影响：菌体生长力强；菌体内源蛋白酶要弱；菌株性能稳定；分泌能力强。;4、哺乳动物细胞; 三类主要基因工程