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兽医微生物学实验 实验一 显微镜的构造和使用及细菌形态结构的观察 进入实验室的注意事项 1。穿工作服 2。书本等物品放入抽屉 3。树立无菌观念 4。不能抽烟、吃零食 5。爱护公物，注意节约 一、目的要求 1。了解显微镜的简单构造和原理 2。学习掌握油镜的使用技术 3。观察细菌的基本形态 二、普通光学显微镜的简单原理 1。支持部分：镜臂、镜台、镜筒、粗细调节器 2。放大部分：接目镜、接物镜 3。照明部分：反光镜、聚光器、滤光镜 三、几种显微镜的简单原理 1。暗视野 2。相差 3。荧光 4。电子 四、油镜的识别及使用原理 五、使用完毕显微镜及标本片的处理 作 业 1。普通显微镜与油镜使用上有何区别？ 2。绘出你所观察到的细菌形态 3。你最喜欢哪个细菌，为什么？ 实验二 细菌的抹片制备及染色 一、目的要求 1。掌握细菌抹片的制备方法 2。掌握几种常用的染色方法和技术及无菌操作技术 3。巩固显微镜的使用，了解细菌的染色特性、形态 二、材料 大肠杆菌：斜面，肉汤 金黄色葡萄球菌：斜面，肉汤 枯草杆菌：斜面 三、制片及染色步骤 取干净玻片-抹片-干燥-固定-染色-干燥镜检 四、常用的几种染色方法 （一）革兰氏染色法 1。草酸铵结晶紫染色1-2’，水洗 2。革兰氏碘液媒染1-2’，水洗 3。95%酒精脱色约30’’-1’，水洗 4。沙黄水溶液复染10 ’ ’-30 ’ ’，水洗 5。吸干，镜检 （二）姬姆萨染色法 1。甲醇固定3 ’，时间长短均可 2。姬姆萨液足量30 ’或数小时至24h，水洗 3。吸干镜检 （三）瑞氏染色法 抹片干燥无需固定，直接滴加染色1-3 ’，再加等量中性蒸馏水，轻轻混匀，续染15 ’，水洗，吸干镜检 （四）美兰染色法 1。固定好抹片加上足量染液2-3 ’ 2。吸干镜检 作业 1。说说你的实验结果 2。根据实验体会，你认为制备染色标本时应注意哪些事项？ 3。作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？其染色成败关键一步是什么？ 实验三 培养基的制备 一、目的要求 1。掌握基础培养基制备的原则和要求 2。掌握一般培养基的制备过程及pH测定 二、实验材料（略） 三、制作的一般要求 须含有细菌生长所需的营养物质 盛器需无菌，且不含抑菌生长的物质 pH应符合细菌生长的要求，一般在7.2~7.6 要过滤，应为透明或半透明状，以便观察细菌生长变化 制好后需高压灭菌 四、步骤 称取→ 溶解→调pH 过滤→分 灭菌→菌检 普通肉汤的制备 蛋白胨 10g，牛肉膏 5g，NaCl 5g K2HPO4 1g，蒸馏水 1000ml 分别称取以上物品，置铝锅内加热溶解。取5ml肉汤于试管内用0.1mol/L NaOH校pH至7.4-7.6，根据其用量计算所配培养基需用的1mol/L NaOH用量，用滤纸过滤，分装至短试管 所需1N NaOH的量 培养基量 × 校正时所需0.1mol/L NaOH量 5 × 10 普通琼脂培养基的制备 取已配好的肉汤500 mL于铝锅内，加入琼脂10g，加热溶解，用纱布、棉花过滤、分装 灭菌：将分装好的培养基扎口后置高压灭菌锅内121℃（15磅）20-30分钟 菌检：抽取样品，置37 ℃ 24h 作 业 制作培养基时应注意哪几点？ 为什么肉汤培养基在高压灭菌前pH要略调高一些？ 为什么校正pH时，调校少量培养基用0.1 mol/L NaOH，而调校大量培养基时用1 mol/L NaOH？ 说说你们组的产量和品质 实验四 细菌分离培养及移植 一、目的 掌握细菌分离培养的基本要领和常用方法 使被检材料适当稀释，以求获得独立单在菌落 二、需氧分离培养法 平板分离培养法 芽胞需氧分离培养法 化学药品分离培养法 实验动物分离培养法 三、实验内容 平板划线 肉汤培养 斜面移植 接种完毕标明细菌、日期、姓名，置37℃培养24h 四、作业 何谓纯培养？分离培养的目的何在？ 在挑取固体培养物上的细菌作平板划线时，为什么每次都要将接种环上剩余的细菌烧掉？ 为什么要把培养皿倒置培养？ 实验五 药敏试验 一、目的要求 学会药敏试验的操作方法及观察抑菌圈的范围 二、试验材料 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 药敏纸片： 卡那霉素，阿米卡星，红霉素，复方新诺明，呋喃妥因，庆大霉素，链霉素 镊子、酒精灯等 三、操作步骤 1. 每人取平板接种细菌，致密划线 2. 以无菌镊子将各种药敏纸片分别是贴于培养基表面 3. 倒置，37℃培养24h，观察结果 四、结果判定 根据药敏纸片周围有无抑菌