原核基因表达调控讲座.pptVIP

Trp Trp 高时 Trp 低时 mRNA O P trpR 调节区 结构基因 RNA聚合酶 RNA聚合酶 色氨酸操纵子的作用原理 操纵子关闭 （三）激活蛋白结合正调控元件而对转录起始进行正调控 1．正调控蛋白可结合启动子邻近序列进行 调控 2．激活蛋白结合增强子可远距离进行转录 起始正调控 ntrC蛋白对转录的正调控作用 三、原核基因表达的转录过程可通过 不同模式进行调控 （一）去阻遏和正调控机制对转录起始进行 双重调控 1．乳糖操纵子受阻遏蛋白（负性调节）和 CAP（正性调节）的协调调节 乳糖操纵子由cAMP-CAP系统进行正调控 TTTACA TATGTT N17 N6 A lac TTGACA TATAAT 共有序列 乳糖操纵子是弱启动子，被RNA-pol结合后，还需cAMP-CAP（分解代谢物基因活化蛋白）活化 + + + + 转录 无葡萄糖，cAMP浓度高时 有葡萄糖，cAMP浓度低时 Z Y A O P DNA CAP CAP CAP CAP CAP CAP CAP CAP结合位点 mRNA 低乳糖时 高乳糖时 葡萄糖低 cAMP浓度高 葡萄糖高cAMP浓度低 RNA-pol O O O O Ｉ Ｉ 无转录 无转录 低水平转录 2．AraC的别构调节使阿拉伯糖操纵子调控更精细 阿拉伯糖操纵子的调控机制 araBAD的表达调控必需条件：araC、阿拉伯糖、cAMP-CAP 当araC表达太多会出现自我负反馈调节 当araBAD表达太多，阿拉伯糖被快速代谢，结合型的araC下降，导致araBAD又关闭 C蛋白在正常情况下结合于araBAD的operator上，量很多时才起自我负反馈 araBAD的调控总结 （二）色氨酸操纵子的弱化机制实质是 转录与翻译调控的偶联 色氨酸操纵子(trp operon)除了产物阻遏负调控外，还有转录衰减(attenuation)调控方式。 衰减是转录-翻译的偶联调控。 色氨酸操纵子 色氨酸是构成蛋白质的组分，细菌要经过许多步骤合成色氨酸。 一旦环境能够提供色氨酸时，细菌就会充分利用外界的色氨酸、减少或停止合成色氨酸，以减轻自己的负担。 色氨酸操纵子负责调控色氨酸的生物合成。 当培养基中有足够的色氨酸时，该操纵子自动关闭；缺乏色氨酸时，操纵子被打开。 通过色氨酸操纵子的调控可使基因的转录在两个顺式终止子结构的某处终止。 色氨酸在这里不是起诱导作用而是阻遏，能帮助阻遏蛋白发生作用── 辅阻遏分子。 色氨酸操纵子结构 色氨酸的合成分5步，需5种酶催化： trpE、trpD、trpC、trpB、trpA：邻氨基苯甲酸合成酶、邻氨基苯甲酸焦磷酸转移酶、邻氨基苯甲酸异构酶、色氨酸合成酶和吲哚甘油-3-磷酶合成酶 trp操纵子中产生阻遏物的基因是trpR，该基因距trp基因簇很远，以组成性方式低水平表达分子量为47000的调控蛋白R。 R本身没有活性，当环境提供足够浓度色氨酸时，R与色氨酸结合活化，阻遏结构基因的转录。 阻遏－操纵机制：粗调开关 trp操纵子中对应于色氨酸生物合成的细调开关，控制已启动的转录是否继续。 衰减子的调控 现象：当色氨酸达到一定浓度，但还不足以活化R时，产生色氨酸合成酶类的量已经明显降低，而且产生的酶量与色氨酸浓度呈负相关。 Ptrp-o与第一个结构基因trpE之间162bp的一段前导序列(L)，实验证明当色氨酸达一定浓度时，RNA聚合酶的转录终止。 L：含有编码由14个aa的ORF，2个Trp相连， ORF前有RBS。 色氨酸浓度很低时，Ptrp开放，同时核糖体开始翻译。 色氨酸浓度较低时，生成的trp-tRNA量少，核糖体沿mRNA翻译移动的速度慢，赶不上RNA聚合酶沿DNA移动转录的速度，2区和3区形成双链结构（4区还未转录出来） ，前导序列中终止子结构不能形成，转录继续进行。 当色氨酸浓度较高时， trp－tRNA 浓度随之升高核糖体不在色氨酸密码子处停止，2区与3区配对被破坏、3区与4区配对，终止子结构形成，转录减弱。 原核基因表达调控讲座 第一节 原核生物基因表达特点Characteristics of Gene Expression of Prokaryotes 操纵子在研究基因表达的重要性 具有普遍性； 真核生物研究的借鉴； 开拓了分子识别（molecular recognition)的研究； 研究成果应用于实践，具有指导意义。 一、操纵子是原核生物的基因转录单元 操纵子理论实验依据 实验模型：细菌的乳糖代谢酶类诱导 突破点: 乳糖阻遏蛋白基因lac