实验一蛋白质的等电点测定和沉淀反应.pptVIP

实验一、蛋白质的等电点测定和沉淀反应 一、目的 1.了解蛋白质的两性解离性质 2.学习测定蛋白质等电点的一种方法 3.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识 4.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义 二、原理 蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡： 等电点:当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目 相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。 四、操作步骤 （一）酪蛋白等电点的测定（1）取同样规格的试管4支，加入各试剂，然后混匀。此时 4个管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。 （2）各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL， 加一管，摇匀一管。观察其混浊度。静置10分钟后，再观察其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。  （二）蛋白质的沉淀及变性1、蛋白质的盐析 蛋白质的盐析: 无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。 盐溶:由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。 于试管中加入蛋白质溶液5mL ，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是