多酚含量测定法-总酚含量测定法-Folin酚法-Folin-Ciocalteu试剂法-操作图解.docVIP

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2019-09-02 发布于浙江
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多酚含量测定法-总酚含量测定法-Folin酚法-Folin-Ciocalteu试剂法-操作图解.doc

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PAGE PAGE 3 多（总）酚含量测定法（Folin-Ciocalteu试剂法）李熙灿/Xican Li （广州中医药大学） [文献] Xican Li, Jing Lin, Yaoxiang Gao, Weijuang Han, Dongfeng Chen. Antioxidant activity and mechanism of Rhizoma Cimicifugae. Chemistry Central Journal. 2012; 6(1):140. 操作图解 [溶液配制] Folin-Ciocalteu试剂(0.25mol/L)的配制取2mol/L Folin-Ciocalteu试剂1mL，加蒸馏水7mL，充分混合，得0.25mol/L的Folin-Ciocalteu试剂,共8mL。 2 15%Na2CO3溶液（W/V）的配制取Na2CO3?10H2O溶3.0 3 标准溶液的配制（以连苯三酚为例）精确称取连苯三酚标准品10mg．用水溶解并定容到50mL，得0.2mg/mL的对照品标准溶液。 4 连苯三酚标准曲线的绘制样品液浓度 mg／mL 加样量 A760 0.2mg/mL样品母液/ mL 补加溶剂95乙醇/ mL A760 平均值 SD 0.000 0 0.50 0.03 0.038667 0.017442 0 0.50 0.023 0 0.50 0.063 0.004 0.01 0.49 0.15 0.166667 0.015861 0.01 0.49 0.162 0.01 0.49 0.188 0.008 0.02 0.48 0.29 0.294667 0.003682 0.02 0.48 0.299 0.02 0.48 0.295 0.02 0.05 0.45 0.749 0.729 0.016753 0.05 0.45 0.708 0.05 0.45 0.73 0.032 0.08 0.42 1.088 1.092 0.00432 0.08 0.42 1.09 0.08 0.42 1.098 0.04 0.1 0.4 1.393 1.394333 0.031857 0.1 0.4 1.356 0.1 0.4 1.434 0.048 0.12 0.38 1.747 1.636 0.092307 0.12 0.38 1.521 0.12 0.38 1.64 0.06 0.15 0.35 1.983 1.927667 0.041516 0.15 0.35 1.883 0.15 0.35 1.917 A = 32.16733*C + 0.06012, R=0.998 线性范围：连苯三酚0.00-0.06mg/mL，A值在0.039-1.928之间。 5 样品溶液的配制样品母液（1mg/mL）：精确称取样品2mg，用95乙醇溶解并定容到2mL，得1mg/mL样品母液。 0.2mg/mL样品母液/ mL 补加溶剂95乙醇/ mL 次数现象 0.2 0.3 平行测三次变蓝如怀疑样品自身有吸收，可加做空白对照组。用0.5mL95乙醇代替0.5mLFolin-Ciocalteu试剂+即可，注意观察A值大小。 6 多酚含量的计算依上述公式A = 32.16733*C + 0.06012, 由A值即可求得浓度C值。 7 说明 7.1 不同的分光光度计所测得的A值可能不一样，所以，同一次实验要用同一台分光光度计； 7.2 Folin-Ciocalteu试剂：可向试剂公司购买，一般其浓度为2 M，使用前最好稀释。也可以自配方法如下：将100g钨酸钠(Na2WO4 ·2H2O), 25g钼酸钠( Na2MoO4·2H2O) ,700 mL蒸馏水，50 mL 85%磷酸及100 mL浓盐酸装入带回流装置的2000mL圆底烧瓶中，充分混合，文火缓慢回流10h,在加入150g硫酸锂(Li2SO4),50 mL蒸馏水及数滴液溴，然后将烧瓶内溶液开口煮15min，以驱除过量的溴，冷至室温后用容量瓶定容至1000mL，过滤。滤液呈微绿色。置于冰箱中长期冷藏备用临用时稀释。（钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂，都比较贵)