结直肠癌中REIC表达的临床病理意义与抑癌机理分析.pdfVIP

·中文论著摘要· 结直肠癌中REIC表达的临床病理意义 及抑癌机理研究 刖 罱 人类肿瘤发生的机制是十分复杂的，已经证实恶性肿瘤发生、发展是多基因 改变的结果。结直肠癌是人类常见胃肠道肿瘤之一，为多步骤、多阶段、多因素 参与的复杂基因病，在我国具有较高的发病率和致死率。特定基因的表达异常在 肿瘤中发挥着不同的功能，揭示其在肿瘤发生和演进的具体机制是十分重要的。 目前已知，抑癌基因的功能失活、原癌基因的异常激活、基因表达调控异常等均 与肿瘤的发生密切相关。 REIC(reducedinimmortalized expression differencesystent)发现的，由于其在永生化细胞中比相应正常细胞表达降 analysis 低而得名。研究表明，在恶性肿瘤中REIC可调节肿瘤细胞的增殖和凋亡，对肿 瘤具有抑制作用。因此通过检测REIC在结直肠癌组织中表达的临床病理意义及 对癌细胞恶性表型的影响，了解REIC在结直肠癌发生和演进过程中的抑癌作用， 为结直肠癌早期诊断和靶向治疗提供新的依据。 实验方法 l、利用免疫组织化学检测结直肠癌中REIC蛋白表达情况，比较其表达与结 直肠癌发生、临床病理特征及预后的关系。 2、应用westernblot和real．timePCR检测结直肠癌组织及相应的癌旁非肿瘤 mucosa，NNM)组织REIC蛋白和mRNA表达水平。 黏膜(non．neoplastic 3、RT-PCR检测结直肠癌细胞中的REICmRNA含量，酶联免疫吸附测定 linkedimmunosorbent (enzyme 蛋白的分泌水平。 16，CCK．8(cell 4、转染pcDNA3．1．REIC质粒入结直肠癌细胞HCT-15和HCT-1 kit-8)检测细胞增殖：流式细胞术(flow counting cytometry，FCM)检测细胞早 期凋亡和线粒体膜电位；Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。 5、利用重组REIC蛋白(recombinantREIC，rREIC)处理对结直肠癌细胞HCT．15 和HC％116，CCK-8检测细胞增殖；FCM检测细胞早期凋亡和线粒体膜电位； Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。 实验结果 l、结直肠癌中REIC蛋白表达与肿瘤发生、临床病理特征和预后的关系 免疫组织化学检测结果显示结直肠癌癌旁组织、结直肠腺瘤组织、结直肠癌 组织及浸润的巨噬细胞的胞浆中存在REIC蛋白表达。REIC蛋白在结直肠癌癌旁组 织、结直肠腺瘤组织、结直肠癌组织表达逐渐降低(PO．001)。 member 和核内生长抑制因子5(inhibitor 5，ING5)的表达相关(P ofgrowthfamily 0．05)，与患者的年龄、性别以及肿瘤的大小、淋巴侵袭、血管侵袭和淋巴结转 移等因素无关(PO．05)。 显著相关性(尸0．05)。Cox风险比例回归模型筛分析显示淋巴侵袭、血管侵袭、 InternationalCancer 淋巴结转移和UICC(Unionfor Contr01)分期是结直肠癌预 后的独立危险因素(PO．05)，而患者年龄、性别、肿瘤大小、侵袭深度、分化 程度和REIC蛋白表达不是结肠癌独立的预后风险因素(PO．05)。 2、real．time mRNA水平明显低于相 PCR检测结果显示结直肠癌组织中REIC 应的癌旁组织(尸O．01)。Westernblot检测结果显示结直肠癌及对应癌旁组织中 REIC蛋白表达无明显差异