Ch14-Gangan生化课件yd--核酸的生物合成复制.pptVIP

核酸的生物合成（复制）DNA Biosynthesis （Replication） 本章主要内容 基本概念： DNA的生物合成 —— 复制 DNA的复制、端粒DNA的复制 DNA逆转录合成 DNA损伤和修复 RNA的生物合成 —— 转录 参与转录的主要物质 基因表达调 大纲要求 掌握：中心法则、复制、半保留复制、转录、逆转录的概念和生物学意义，启动子的概念及结构特点，参与DNA和RNA生物合成的主要物质及其作用。 熟悉：半保留复制、转录、逆转录的主要过程，基因突变的类型和修复方式。 了解：端粒和端粒酶概念及其意义 基本概念 基因（gene）/基因组（genome）: 复制（replication）： 转录和逆转录（reverse transcription）： 中心法则（the central dogma）： 端粒（telemere）/端粒酶（telemerase） ： 半保留复制（semiconservative replication）： 冈崎片断（Okazaki fragment）： 模版（template）/引物（primer） 基因突变（gene mutation）： 启动子(promoter)： 中心法则(the central dogma) 复制和转录的关系 第一节 DNA的生物合成 DNA的复制 端粒DNA的复制 逆转录 DNA损伤修复 半保留复制 (semi-conservative replication) 双向复制 (bidirectional replication) 半不连续复制 (semi-discontinuousreplication) 方向性和高保真性（High-fidelity） 半保留复制 概念： DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板按碱基配对规律指导合成新的互补子链。最终得到与亲代DNA碱基序列完全一样的两个子代DNA分子，每个子代DNA分子都含有一股亲代DNA链和一股新生DNA链 实验依据（Meselson-Stahl实验） 1958，15NH4Cl标记E.Coil并用CsCl密度梯度离心分离DNA 意义： 半保留复制是DNA复制的最重要特征 体现了遗传的保守性（但不是绝对的） DNA半保留复制 DNA双向复制 　 DNA双向复制 参与DNA复制的主要酶类 拓扑异构酶 解旋酶 DNA聚合酶 引物酶 连接酶 参与DNA复制的主要酶类 DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase，DNA-pol) 活性： 5??3? 的聚合活性 5??3?核酸外切酶活性 3??5?核酸外切酶活性 聚合反应机理 核酸外切酶活性 3? ? 5?外切酶活性（proofreading） 原核生物的DNA聚合酶 DNA聚合酶II (DNA-pol II) 具有5′→3′的聚合酶活性。 在无polⅠ及polⅢ的情况下暂时起作用 对模板的特异性不高, 主要是参与DNA损伤的应急状态修复。 原核生物的DNA聚合酶 DNA聚合酶III (DNA-pol III) 是复制延长中真正起催化作用的酶。 由10种亚基组成不对称的聚合体。 α，ε，θ亚基组成核心酶，α亚基具有5‘→3’的聚合活性，ε亚基具有3‘→5’外切酶活性， θ亚基可能起组装作用 β亚基(DNA夹子)能夹稳模板链，负责酶沿DNA模板滑动的作用 其余亚基统称为γ-复合物, 是DNA夹子加载蛋白 （一）DNA-pol的核酸外切酶活性和即时校读 （二）复制的保真性和碱基选择 ? DNA聚合酶靠其大分子结构协调非共价（氢键）与共价（磷酸二酯键）键的有序形成。 ? 嘌呤的化学结构能形成顺式和反式构型，与相应的嘧啶形成氢键配对，嘌呤应处于反式构型。 单链DNA结合蛋白 (single stranded DNA binding protein, SSB) 在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整性。 引物酶(primase) 依赖DNA的RNA聚合酶。 对利福平不敏感。 可以催化游离NTP聚合。 在大肠杆菌，是dna G 基因的表达产物。 催化RNA引物的生成。 原核生物的DNA生物合成 复制的起始 DNA解链 引发体和引物 单链结合蛋白SSP 复制的延伸 复制的终止 1. DNA的解链 DNA解成单链 由拓扑异构酶松弛超螺旋，解螺旋酶 解开双链，SSB结合到单链上使其稳定。 ? 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 ? 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 ? 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 ? 复制的