三糖铁试验标准操作规程.doc

三糖铁试验标准操作规程 1．目的 规范三糖铁试验标准操作规程。 2．原理 能发酵葡萄糖和乳糖的细菌产酸产气，使三糖铁的斜面和底层均呈黄色，并有气泡产生；只能发酵葡萄糖，不发酵乳糖的细菌，使斜面呈红色，而底层呈黄色；有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，生成硫化氢,硫化氢遇铅或铁离子形成黑色的硫化铅或硫化铁沉淀；分解尿素，呈红色。 3．试剂 3.1 三糖铁琼脂成分 上层：乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1g 硫酸亚铁 0.2g 蛋白胨 20g 琼脂 20g 硫代硫酸钠 0.2g 氯化钠 5g 0.2%酚红 12.5ml 蒸馏水 1000ml 下层：牛肉膏 1.8g 酸性磷酸钾 1.2g 0.2%酚红 1.8ml 蛋白胨 6g 琼脂 3g 氯化钠 3g 尿素 12g 蒸馏水 600ml 3.2 制备 上层制备：成分混合后，加热溶解，校正pH至7.6，分装三角烧瓶内，115℃灭菌15分钟。 下层制备：下层成分（除尿素外）混合后，加热溶解，校正pH至7.2，然后加入尿素分装每管约1.5ml，115℃灭菌15～20分钟。再取葡萄糖0.5g、0.1%酚红溶液10ml混入已溶解的琼脂中。充分摇匀，使其溶解，分装于试管中，每管约1.5ml，置高压灭菌器内，经115℃灭菌10分钟。取出后，待其直立凝固。下层凝固后，用无菌手续，将上层培养基成热装于下层培养基上面。凝固后将其置于37℃培养箱中，培养18～24小时，如无杂菌污染，可存于冰箱中备用。 4．质控 大肠埃希菌ATCC25922，三糖铁琼脂上、下层均为黄色，福氏志贺菌CMCC51573，三糖铁琼脂上层不变，下层为黄色。 5.操作步骤 挑取纯菌落接种于三糖铁琼脂上，35℃孵育18～24小时。 6.结果判断 出现黑色沉淀物为硫化氢阴性。 7.注意事项 三糖铁琼脂上下层配制时，高压灭菌时掌握好温度和时间，以免培养基中的糖被分解。 8.临床意义 三糖铁琼脂用于观察细菌对糖的发酵能力，以及是否产生硫化氢，可初步鉴定细菌的种属。