DNA重组的技术基本工具huang.pptVIP

　 　 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ 小结 基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工 具 具备的 条件 能在宿主细胞中自我复制并 稳定存在 具一个或多个限制酶切位点 具标记基因 对宿主细胞无害 质粒、 λ噬菌体衍生物 、动植物病毒 补充知识点：1.原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。 P11 RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.(以模板转录然后脱落) * 欢迎进入朱建标老师之《生命课堂》 选修三 现代生物科技专题 专题一 基因工程 专题二 细胞工程 专题三 胚胎工程 专题四 生物技术的安全性和伦理问题 专题五 生态工程 选修三 现代生物科技专题 教学目标： 简述DNA重组技术所需要三种工具的作用； 认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新 教学重点： DNA重组技术所需要三种工具的作用 教学难点： 基因工程载体需要具备的条件 课时安排：共3课时 专题一 什么叫基因工程？ 基因工程，又叫DNA重组技术。是指按照人们的愿望，在DNA分子水平上进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 一、基因工程的概念 1、原理： 2、操作水平： 3、又称： 4、优点： 基因重组 DNA分子水平 DNA重组技术或基因拼接技术 ⑴ 定向改造生物性状(目的) ⑵ 克服远缘杂交不亲和的障碍 ⑶ 育种周期短 5、技术： DNA重组技术和转基因技术 1、艾弗里证明DNA是遗传物质，DNA可从一种生物个体转移到另一种生物个体。 二、基因工程的诞生 P2-3 （一）基础理论： 2、沃森、克里克建立了DNA的双螺旋结构模型 3、梅塞尔松、斯塔尔证明DNA的半保留复制 4、克里克等提出中心法则： DNA RNA 蛋白质 转录 翻译 逆转录 复制 5、1963年尼伦伯格和马太破译编码氨基酸的遗传密码，1966年霍拉纳用实验加以证明。 1)基因转移载体的发现 2)工具酶的发现 3)DNA合成和测序技术的发明 4)DNA体外重组的实现 5)重组DNA表达实验的成功 6)第一例转基因动物问世 7)PCR技术的发明 （二）技术发明： 红色荧光蛋白 红色荧光蛋白基因 基因表达 剪切 → 拼接 → 表达 → 导入 三、 DNA重组技术的基本工具 ㈠限制性核酸内切酶——“分子手术刀” ①来源： 主要从原核生物中分离纯化出来。 ②种类： 已从近300种微生物中分离出4000种限制酶。 ③作用： 1.能识别双链DNA的某种特定核苷酸序列 2.使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 磷酸二酯键： 磷酸二酯键 5ˊ 3ˊ 3ˊ 5ˊ ㈠限制性核酸内切酶——“分子手术刀” ④DNA末端： 黏性末端和平末端 ⑤限制酶的识别序列： 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，少 数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成回文序列 回文序列：一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致 限制酶的识别序列： EcoRI限制酶的切割： 中轴线 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC 序列，并在G和A之间切开。 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRI限制酶的切割： 中轴线 黏性末端 黏性末端 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC 序列，并在G和A之间切开。 C C C G G G G G G C C C SmaI限制酶的切割： 只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 中轴线 SmaⅠ 平末端　　　平末端 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？P4 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物 在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机 制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细 菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会 利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的 安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切 割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的 目的。 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶 切几个磷酸二之间？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个