分离分子量小的物质.pptVIP

分离分子量小的物质： 用交链度大，网孔小（孔隙小） 的凝胶。 分离分子量大的物质： 用交链度小，网孔大（孔隙小） 的凝胶。 分离低聚糖、苷类：用孔隙小的 sephadex G—25,G—50。 纯化多糖： 用孔隙小的 sephadex G—15,G—25，去除无机盐和 小分子化合物。 分离多糖： 用孔隙大的 sephadex G—200。 注：商品凝胶的型号是按交链度 的大小分类的，以每克干凝胶吸 水量10倍的数值来表示，如G—25 型凝胶表示为每克吸水2.5ml 的葡 萄糖凝胶。 6.制备性区域电泳 适合分子大小，负电荷不 同的多糖分离。 电泳常用载体：玻璃粉 操作方法： 1.用水将玻璃粉调拌成胶状， 装柱。 2.用电泳缓冲液 （0.05mol/L 硼砂水溶液，PH9.3 ）平衡3天。 3.将多糖加于柱上端，接通电源。 4.电泳时间为5—12小时。 5.电泳完毕后将玻璃粉载体推出 柱外，分割后分别洗脱。 6.检测。 三.分离实例 1.苷类常用提取方法： 中药 ↓EtOH提取 EtOH提取物 ↓减压回收EtOH 浓缩物 ↓石油醚提取 ↓￣￣￣￣￣￣↓ 石油醚 残留物 （油脂类） ↓ Et2O或CHCl3提取 ↓ Et2O或CHCl3提取 ↓￣￣￣￣￣￣￣￣↓ Et2O或CHCl3 残留物 （提取物为苷元 ） ↓ EtOAc提取 ↓￣￣￣￣￣￣￣￣￣↓ EtOAc提取物 残留物 （含糖较小的苷） ↓n—BuOH提取 n—BuOH提取物 （含糖较多的苷） 2.香菇多糖的分离实例： 从香菇(lentinus edodis(Berk) Sing) 分离出6种多糖。 其中香菇多糖（lentinan）及 LC—11的肿瘤抑制率较高。 香菇200Kg ↓热水提取 提取物￣￣￣￣￣￣↓￣￣￣￣￣￣￣↓ ↓×1EtOH沉淀 ×3 EtOH ↓溶液 沉淀物L ↓ 水溶液 ↓0.2mol/L CTA—OH, PH 2.8 沉淀 ↓20%HoAc ↓￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣↓ 不溶物LC—3 溶液 ↓ 6%NaOH ↓ ×3 EtOH 溶液部分 沉淀LC—1（30g） ↓ ×3 EtOH ↓ H2O离心 沉淀 上清液 ↓seveg 法去蛋白质 ↓CAT—OH 0.2mol/L 香菇多糖 ↓渐增PH，分步沉淀 （接下页） ↓ ↓￣￣￣￣￣￣↓￣￣￣￣￣￣↓￣￣↓￣￣↓ L