植生生化实验解读北大吴光耀.pptVIP

2011年精英教案第五届全国中学生物竞赛培训 植生、生化实验解读课 北京大学生命科学学院 吴光耀 教授 1. 蛋白质测定 (1) 总N量测定 有机N(甘氨酸) + H2SO4 —→ 2CO2 + 3SO2 + 4H2O + NH3 (NH4) 2SO4 + 2NaOH —→ 2H2O + Na2SO4 + 2NH3 NH4HB4O7+ HCl + 5H2O —→ NH4Cl + 4H3BO3 用酸滴定氨 1. 蛋白质测定 (2) 双缩脲法 测两个以上的肽键 碱性环境双缩脲与Cu++生成紫红色化合物 540nm [(NH2) 2CO] 2 —→NH2-CO-NH-CO-NH2 +NH3 1. 蛋白质测定 (3) Folin-酚法 是改进的双缩脲法 640nm 同时测定了酪氨酸酚基。 1. 蛋白质测定 (4) 紫外法 280nm 比色 1. 蛋白质测定 (5) 考马斯亮蓝法 考马斯蓝G-250可与蛋白结合, 从红色染料转变成蓝色。 595nm 测定吸收值 2. 核酸测定 (1) RNA 测定—→地衣酚法 RNA + HCl —→糠醛(核糖转变) 糠