高效液相色谱检测技术说课讲解.ppt

高效液相色谱检测技术 教师：刘深勇 内容概要 HPLC即 High performance liquid chromatography, 或 High pressure liquid chromatography，译为：高效液相或高压液相。 高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项高效、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重要手段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 一、HPLC 简介 HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性，从而使不同样品得到分离。 高效液相色谱法自20世纪60年代问世以来，由于使用了高压输液泵、全多孔微粒填充柱和高灵敏度检测器，实现了对样品的高速、高效和高灵敏度的分离测定。高效液相色谱由于吸取了经典液相色谱的研制经验，并引入微处理机技术，极大的提高了仪器的自动化水平和分析精度。现在用微处理机控制的高效液相色谱仪，其自动化程度很高，既能控制仪器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液收集、检测器功能等)，又能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加，以及对保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了高效率、功能齐全的分析工具。 高效液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20% ，而80% 则需用高效液相色谱来分析。HPLC因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析，世界各国己将该法收载于药典。 高压：液体作为流动相流经色谱柱时，受到 的阻力较大，施加高压能使液体迅速通过，一般高达150-350 ×105Pa。 高速：载液在色谱柱内的流速较之经典液相色谱法高得多，一般可达1-10mL/min。 高效：高效液相色谱法的柱效能可达3万塔板/米，而气相色谱法的柱效能仅为2000塔板/米。 高灵敏度：采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度，荧光检测器可达10-11 g 。 高效液相色谱法特点 HPLC主要知名品牌 沃特斯（Waters　 安捷伦（Agilent） 岛津（Shimazu） 其它：戴安、菲尼根、热电等。 HPLC的特点 GC与LC的比较 高效液相色谱仪 液相色谱仪最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）。此外，还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等。 液相色谱仪的工作过程：输液泵2将流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器3将样品导入,流动相将样品带入色谱柱4,在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测器5，检测到的信号送至数据系统6记录、处理或保存。 一、高效液相色谱仪流程 馏分收集器 高压输液系统 梯度洗脱装置 储液器 高压泵 进样器 色谱柱 检测器 数据处理系统 HPLC的基本结构 分离部分 分析部分 控制部分 岛津LC-20A　 见HPLC结构外观 Waters 机型 Waters 机型 Thermo fisher液相色谱－质谱联用 大连依利特 北京普源精电 北京北分 上海伍丰 江苏天瑞LC310　 FL2200　浙江福立 北京东西分析 莱伯泰科HPLC HPLC结构的几种形式 串联式二元高压泵系统 并联式二元高压泵系统 四流路串联式单高压泵系统 HPLC的不同类型主要在于高压输液泵的区别。 通常有以下几种形式： 串联式二元高压泵HPLC结构示意图 分离部分 分离部分由高压输液泵、色谱柱及相关组件组成。 由高压输液泵吸取流动相，使之进入色谱柱，由进样器注入样品后，由色谱柱进行分离。 在高压输液泵之前常用脱气机。 在色谱柱部分要装柱温