第四章茎尖分生组织培养.pptVIP

第四章茎尖分生组织培养;一、概念和意义 1.概念 茎尖分生组织培养：指对不超过0.1mm的茎尖或几十微米的茎尖进行的培养。 特点：可获无病毒苗，操作困难，成苗时间长。 普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、易成活、成苗时间短、繁殖速度快。 ;;二、茎尖分生组织培养一般方法 1.材料的制备 健壮枝梢 去除叶片 分成1-2cm 自来水冲洗 消毒 75%的酒精30秒 0.1%升汞或20倍次氯酸钠消毒8-10min 无菌水 修剪剥离茎尖，通常切割下顶端0.2~0.5 mm叶原基??茎尖（无菌水） 接种。;;2.培养基 多为MS培养基及其改良配方，还有White、B5等。 3.培养条件 （1）温度：26℃~28℃ （2）光照：光培养的效果通常比暗培养好。 （3）湿度：与其他器官培养相似。;一、病毒的危害 多数栽培植物，尤其无性繁殖植物，都易受到一种或几种，甚至几十种病毒的侵染。例如，草莓感染60多种病毒。并且随着栽培时间的推移，侵染病毒的种类越来越多。 受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大幅度下降，品质变劣，甚至完全丧失商品价值。因此说，病毒带来极大的危害。;;目前，对细菌和真菌侵染的病害，可以通过药物处理达到治愈的目的，如多菌灵等。但目前，还没有药物能治病毒病。 种子一般不带病毒，种子繁殖植物可以得到无菌植株。但对于无性繁殖植物，必须采用一种有效的方法，脱去病毒，才能达到提高产量和质量的目的。;二、病毒侵染的特点 早在40年代，就有科学家(White等)发现病毒在根上和茎上的分布是不均匀的，离根尖和茎尖越近，病毒的密度越低。反之，越高。即病毒在植物体内的分布是不均匀的，分生组织一般无病毒侵染。;分生组织之所以能避开病毒侵染，可能有4方面原因： 1、在植物体中，病毒的移动主要靠两条途径，一是通过维管系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连丝，但这条途径病毒移动速度非常缓慢，难以追赶上活跃生长的茎尖和根尖。 ;;2、在旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很高，使病毒无法进行复制。 3、在茎尖中存在高水平内源激素，可以抑制病毒的增殖。 4、在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”，它在分生组织中的活性应最高，因而使分生组织不受侵染。; 以上是四种可能原因，无论哪种说法正确，事实是分生组织一般不带病毒。因此，利用这一原理，进行茎尖培养，培育无病毒苗。 ;植物脱病毒方法;三、脱毒的方法;热处理法有：温汤处理（热水浸泡）和热风处理两种。;热处理的优缺点 优点: 方法简单，效果明显。 缺点: 1)具有局限性，不能去除所有病毒。只对圆形病毒（苹果花叶病毒），或对线状病毒（马铃薯卷叶病毒）有效；而对杆状病毒（千日红病毒）无效。 2)热处理后只有小部分植株能够存活。极易使植物材料受热枯死，造成损失 3）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。 ;; 马铃薯在37℃下处理10～20天能除去卷叶病毒。;（二）茎尖培养脱毒 1.茎尖培养脱毒的原理 （1）病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖离体培养便可获得无病毒再生植株。 必须指出的是，所谓无病毒，只是相对的，不是绝对的。 （2）茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要，生长素，细胞分裂素，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。因此茎尖越大培养成活率越高。因此对不同植物脱毒适宜的茎尖大小不同。;2.茎尖培养脱毒的方法 （1）取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种。 消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。;（2）接种 材料置10～40倍的双筒解剖镜下，解剖刀切取0.1～0.3mm带有1～2个叶原基的茎尖，接种到培养基上。 ;（3）培养 接种后材料置25+2℃ ，光照度1500-5000LX，每日光照10-16h条件下培养。但一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从生芽。 3.培养基与培养方式 ： （1）培养基：常用MS， White等培养基。 （2）培养方式：茎尖培养一般采用半固体培养基 ;（三）、热处理与茎尖培养结合脱毒 果树等木本植物，热处理后新芽顶端嫁接成活率较低。 茎尖培养时，茎尖过小成活率太低，而茎尖太大又脱除不掉病毒 将热处理后的较大茎尖进行培养获得无病毒植株，可以克服这些缺点。;（四）微体嫁接离体培养脱毒法 应用微体嫁接的原因： 木本植物