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【解析】(1)若用自然生长的外植体进行组织培养,灭菌、消毒顺序为先用70%的酒精浸泡,再用5%的次氯酸钠溶液浸泡 5 min,然后用另一5%的次氯酸钠溶液浸泡5 min,最后在超净台中用无菌水清洗。 (2)常用LB液体培养基扩大培养细菌,用LB固体培养基分离微生物。 (3)从土壤稀释液中分离微生物时,对照组应为LB全营养培养基。制作培养基时,常用琼脂作为凝固剂。尿素在高温下易分解,不能用加热法灭菌,常用G6玻璃漏斗过滤,以除去杂菌。分离细菌常用的方法有划线分离法和涂布分离法。实验组中只有唯一氮源,并不是所有的微生物都能生存,故菌落数量少于对照组。脲酶分解尿素产生氨,氨是碱性物质,能使酚红变为红色。 答案:(1)D (2)LB液体培养基 (3)LB全营养培养基 琼脂 G6玻璃漏斗 涂布分离法 少于 因为能利用尿素的细菌产生脲酶,将培养基中的尿素分解,产生氨使指示剂(酚红)呈红色 3. (2013·宁波模拟)大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群,每克粪便中含有109个,且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌,就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌,因而常将大肠杆菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。请据此回答下列问题: (1)测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目,常用涂布分离法进行测定。该方法首先配制LB_______培养基,进行高压蒸汽灭菌后冷却至60 ℃,在_______旁倒在培养皿中形成平板;对奶茶样品进行一定倍数的稀释,取0. 1 mL奶茶稀释液,加在培养皿的固体培养基上,用_______涂布在培养基平面上,然后进行培养;观察统计培养皿中_______数目;该数据比实际数值要______(高、低),原因是________________________。 实验完成后需要对培养基进行_________处理,然后才能倒掉。 (2)若要对上述培养基中的菌种进行扩大培养,则需配制LB___ _____培养基,灭菌后,将_________在酒精灯火焰上烧红后冷却,然后蘸取单菌落中的菌体接种到新的培养基中,在适宜环境中培养_________h即可。 【解析】(1)微生物的分离通常用固体培养基。为防止杂菌污染,要在酒精灯火焰旁倒平板。在用涂布分离法分离细菌时,为了使细菌均匀涂布在固体培养基上,常用玻璃刮刀把菌液涂布在培养基上。通过观察菌落数推算细菌数目。培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起,共同形成一个菌落,因此观察到的菌落数可能比实际菌落数低。为了防止实验菌污染环境,实验完成后需要对培养基进行灭菌处理,然后才能倒掉。 类型二 大肠杆菌的培养和分离? 【典例2】(2013·浙大附中)大肠杆菌是生活在人和高等动物体内的一种常见细菌,在饮用水的检测中常用它作为水源是否受到污染的指示菌,在遗传学上常作为实验材料,在基因工程中常用它作为受体细胞,为人类的健康和科学技术的发展作出了许多贡献。 请回答下列有关大肠杆菌的问题: (1)在大肠杆菌培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑 、 和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、易培养、 等优点,因此常作为遗传学研究的实验材料。 (2)分离大肠杆菌时常用的接种方法是 法和 法。前者操作简单,后者 更易分开,但操作复杂些。 (3)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间,观察 。 (4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数,要想使所得估计值更接近实际值,下列对操作过程说法不妥的是( ) A.严格操作、多次重复 B.保证待测样品稀释的浓度比较合适 C.倒平板培养 D.计数所有菌落,取其平均值 (5)通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小、硬度和颜色等 对细菌进行初步的鉴定(或分类)。 (6)若用大肠杆菌进行实验,使用过的培养基及其培养物必须经过 处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。 【解析】(1)大肠杆菌的培养除需要合适的营养条件外,还需要适宜的温度、酸碱度(pH)和渗透压。由于大肠杆菌变异类型容易选择、繁殖速度快,常作为遗传学研究的实验材料。 (2)分离微生物常用的接种方法有划线分离法和涂布分离法。前者方法简单;后者单菌落更易分开,但操作复杂些。 (3)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当的时间,观察培养基上是否有菌落产生。若固体培养基被细菌污染,在适宜条件下培养一段时间,细菌会大量繁殖,形成菌落,可根据菌落数量的多少判断污染程度。 (4)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活
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