紫外分光光度法测定峰胶胶囊中总黄酮的含量.docVIP

紫外分光光度法测定峰胶胶囊中总黄酮的含量 万军 兰雁 周霞 （成都中医药大学科技中试中心 成都 610072） 摘 要：本文研究了紫外分光光度法测定蜂胶胶囊中总黄酮的含量。当芦丁浓度在0.00816～0.04896mg/mL范围内，与吸收度呈良好线性关系，r＝0.9999；平均回收率为99.0％。本文方法简单、快速、结果准确。 关键词：蜂胶胶囊 总黄酮 紫外分光光度法 1实验部分 1.1 仪器与试药 TU－1901紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；sartorius BP2111D 电子天平；水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司）；autoscience AS5150A 超声波清洗器。 芦丁对照品（0080－9705）：中国药品生物制品检定所。其余试剂均为分析纯。 1.2 溶液的制备 1.2.1 对照品溶液的制备 取经120℃干燥至恒重的芦丁对照品适量，精密称定，加乙醇制成0.2mg/mL的溶液。 1.2.2 供试品溶液得制备 取本品0.35g精密称定，置50.0mL容量瓶中，加乙醇适量，超声处理（150W，50Hz）45min，取出，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，即得。 2 方法与结果 2.1 测定波长的选择 据药典及文献报道，蜂胶中主要含黄酮类成分，可溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯，故采用甲醇、乙醇、醋酸乙酯、75％乙醇、75％甲醇、60％乙醇作为提取溶剂进行考察。据药典介绍，芦丁最大吸收波长在500nm左右，故取各个样品溶液与芦丁对照品乙醇溶液，以不加样品（但需要加显色剂及NaOH试液）的乙醇溶液为空白，分别于300～600nm波长范围内进行扫描。结果见表1。 表1 不同提取溶剂的提取结果 提取溶剂 甲醇 乙醇 醋酸乙酯 75％乙醇 75％甲醇 60％乙醇 样品吸收波长（nm） 378 402 398 501 378 493 芦丁吸收波长（nm） 503 由表1可见，芦丁对照品在503nm波长处有最大吸收，样品（75％乙醇处理）在501nm波长处有最大吸收，考虑到操作误差及仪器因素，故选择75％乙醇作为样品提取溶剂，501nm作为测定波长。 2.2 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液（浓度0.204mg/mL）1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL，置25.0mL容量瓶重，各加甲醇至6mL，加5％亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，放置6min，加10％硝酸铝溶液1mL，摇匀放置6min，加氢氧化钠试液10mL，摇匀，加乙醇至刻度，摇匀，放置15min，按紫外分光光度法（《中国药典》2000年版一部附录VA），在波长501nm处测定吸收度，以吸收度与其对应的浓度计算回归方程。回归方程C＝2.4445×10－4+8.495×10－2A；r＝0.9999，浓度在0.00816～0.04896mg/mL范围内，与吸收度呈良好线性关系。 2.3 加样回收率试验 精密称取已知含量的供试品（含量5.74％），精密加入对照品适量（三种不同水平，各两份），按正文总黄酮含量测定方法进行含量测定，计算回收率，其中吸收度已扣除样品空白吸收，结果见表2。 表2 回收率测定结果 NO. 吸收度 样品取样量（g） 样品中总黄酮含量（mg） 对照品加入量（mg） 实测总黄酮含量（mg） 回收率(％) 平均回收率(％) RSD (％) 1 0.033 0.0204 1.170 0.816 1.952 95.8 99.0 2.28 2 0.033 0.0202 1.158 0.816 1.952 97.3 3 0.034 0.0171 0.984 1.020 2.005 100.1 4 0.035 0.0178 1.019 1.020 2.059 102.0 5 0.034 0.0139 0.799 1.224 2.005 98.5 6 0.034 0.0135 0.776 1.224 2.005 100.4 2.4 精密度试验 取同一批蜂胶胶囊样品，按供试品溶液的制备与测定法制备供试品溶液，重复进样测定5次，吸收度（A）的相对标准偏差RSD为1.40％。 2.5 稳定性试验 供试品溶液于制样后不同时间进样测定，结果见表3。实验所得RSD为1.62％，说明供试品溶液在制样后30min内测定稳定。 表3 供试品溶液的稳定性考察 测定时间（min） 15 20 25 30 RSD（％） 吸收度（A） 0.521 0.517 0.506 0.504 1.62 2.6 样品测定 取蜂胶胶囊样品6批，按供试品溶液制备，精密量取续虑液5mL至25.0mL的量瓶中，加75％乙醇至10mL，照标准曲线制备项下的方法，自“加