肾活检病理组织染色.docVIP

一、常规染色技术（HE 染色） 苏木素-伊红染色简称HE 染色，是最常用的染色方法，苏木素是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，伊红是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色。HE 染色可以显示肾小球的细胞增生、炎细胞浸润。还能很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿情况。 （一）需要试剂 ①苏木素染液；② 1% 盐酸乙醇液；③氨水；④ 1% 伊红液。 （二）具体染色步骤 1.切片常规脱蜡入水。 2.苏木素染细胞核1 ～ 2 min，水洗。 3.入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。 4.氨水返蓝数秒。 5.流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色。 6.1% 伊红染数秒，水洗。 7.梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。 染色结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈橘红色，其他成分呈深浅不同红色。 （三）注意事项 1.组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色，影响观察。 2.伊红染色的时间需严格控制。过长胞浆染色红色过深。 3.染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。 二、特殊染色技术 （一）过碘酸- 希夫氏染色（PAS 染色） PAS 染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好地显示基底膜，是显示糖原和糖蛋白的基本染色。 1.需要试剂　① 1% 过碘酸；② schiff 氏液染；③苏木素染液；④氨水。 2.具体染色步骤 （1）切片常规脱蜡入水。 （2）入1% 过碘酸氧化10 ～ 15 min，水洗。 （3）入schiff 氏液染10 ～ 30 min，水洗。 （4）苏木素染细胞核1 ～ 2 min，水洗。 （5）入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。 （6）氨水返蓝数秒。 （7）流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。 （8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。 3.染色结果　PAS 阳性物质（多糖和糖原）呈红色，核呈蓝色。 4.注意事项 （1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。 （2）Schiff 氏液染色的时间需严格控制。时间过长标本基底膜着色过深，时间过短标本基底膜着色淡。 （3）入1% 盐酸乙醇分化时间要短，时间长容易使标本退色。 （4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。 （二）六胺银- 马松染色（PAM-Masson 染色） PAM-Masson 染色能更清晰地显示基底膜、免疫复合物和胶原纤维，免疫复合物的定位更为精确。 1.需要试剂 ① 1% 过碘酸；②六胺银液；③苏木素染液；④氨水；⑤ Masson 液；⑥ 1% 亮绿液。 2.具体染色步骤 （1）切片常规脱蜡入水。 （2）入1% 过碘酸氧化10 ～ 15 min，水洗5 min。 （3）入六胺银液72℃染30 ～ 50 min，以显微镜下见基底膜呈黑色即可。 （4）加2% 氯化金数滴于组织，5% 硫代硫酸钠洗。 （5）苏木素染细胞核1 ～ 2 min，1% 盐酸乙醇分化，氨水返蓝。 （6）入Masson 液约10 min，1% 醋酸洗。 （7）入1% 亮绿5 ～ 8 min，1% 醋酸洗。 （8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。 3.染色结果　基底膜及系膜基质黑色，免疫复合物红色。 4.注意事项 （1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。 （2）染色时间与室温和切片厚度有关，室温低、切片厚需染色时间长，反则需染色时间短。入六胺银液染色的时间需严格控制。时间过长基底膜着色过深，时间过短基底膜着色淡。 （3）2% 氯化金分化时间要短，时间长容易使银染退色。 （4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。 （三）马松染色（Masson 染色） Masson 染色能显示各部位的免疫复合物，肾小球硬化和肾间质纤维化程度。 1.需要试剂　①苏木素染液；②氨水；③ Masson 液；④ 1% 亮绿液。 2.具体染色步骤 （1）切片常规脱蜡入水。 （2）媒染剂（10% 重铬酸钾、10% 三氯醋酸等量混合）染10 ～ 30 min，水洗。 （3）苏木素染细胞核1 ～ 2 min，水洗。 （4）入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗，氨水返蓝数秒，水洗。 （5）入Masson 液约10 min，水洗，1% 醋酸洗。 （6）入2.5% 磷钨酸约30 s，水洗，1% 醋酸洗。 （7）入2% 橘黄G 约2 min，水洗，1% 醋酸洗。 （8）入1% 亮绿5 ～ 8 min，1% 醋酸洗。 （9）入100% 乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。 3.染色结果　细胞核红色，胶原纤维绿色，免疫复合物红色。 4.注意事项 （1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。 （2）入Masson 液染色的时间需严格控制。时间过长着色过深，时间过短着色淡。 （3）入1% 亮绿染色时间需要镜下控制，时间长容易覆盖Masson 液红色。 （4）染色