组织切片石蜡切片过程.docVIP

石蜡切片过程 石蜡包埋: 脱水：组织水洗后便可酒精脱水，70% →80% →90% →95%→100%酒精（无水乙醇）→100%酒精，各级酒精脱水时间30-45 min。 （注意：80%酒精内组织可留之较久，当天如果来不及做完就可以暂时保存一晚上，次日再继续做下去。70%的酒精可作为更久的保存剂。） 透蜡：脱水后组织：50%酒精+50%二甲苯 30 - 45min. 二甲苯 （组织透明即可停止) 15min. 50%二甲苯+50%石蜡 20-30min.纯石蜡1 45min. 纯石蜡2 45min. （透腊之前做好准备工作：准备腊杯，烘箱温度保持55—60℃左右，使石腊熔化，温度不宜过高，以免使组织发脆。） 包埋： a.折好纸盒，准备小镊子、酒精灯、解剖针、冷水等。 b.用温热吸管吸取石蜡注入纸盒。等待底稍微凝固，温镊子夹住样品放入盒子中央，面朝底(可以将蜡一次倒入纸盒，然后待蜡表面起膜后，用温镊子夹住样品放入蜡中，待冷却即可，整个操作过程中，切勿让蜡中起气泡)。 c.两手拿着两端，入冷水一半，吹气，使表面石蜡形成移较厚腊层，然后急速全部进入冷水中3分钟。 d.修正蜡块（上下两个面一定要平行并且光滑） e.固着蜡块 二、切片 1.切片（切片时，可以在刀片以及刀片周围涂上一点甘油） 2.贴片烤片（甘油蛋白=1/2甘油+1/2鸡蛋清）（在贴片时，用细吸管取一点点甘油蛋白（越少越好）于载玻片上，然后用手抹匀，手一定要干净。将切片放在载玻片（光亮面朝向下），然后滴几滴冷水使切片悬于水上。接着将载玻片放在37℃上烘烤。 常见问题分析： 切片分离不能形成蜡带： ? 室温过低，蜡过硬。 蜡带弯曲：? 蜡块口下面不平行，或蜡块不与刀刃平行所致。 切片厚薄不一: ? 切片刀或蜡块未固定紧。 切成片后，组织与蜡块脱离：? 脱水不干净等。 蜡片易粘在切片上或蜡片萎缩：? 室温太高或蜡太软或刀的角度太小。 切片破裂：? 浸蜡不足或浸蜡温度过高，或在脱水剂、透明剂中时间过长，引起组织发脆或有杂质，材料脱钙不完全，此种无法补救。 蜡片上卷，切过刀口即破裂：? 刀口太钝或沾有石蜡或刀的角度过大或蜡太硬。 *：包埋时，时间长会使标本变质，过短则石蜡不能透进标本。石蜡包埋过程中，注意控制温度保持在58-60℃，石蜡不能融化。 三、染色 二甲苯脱蜡（1） 10----15分钟 二甲苯脱蜡（2） 10----15分钟 1/2 二甲苯+1/2 100% 酒精 3-----5分钟 100% 酒精 10分钟 95%酒精 10分钟 80%酒精 10分钟 70%酒精 10分钟 50%酒精 10分钟 蒸馏水洗 1-------3分钟 苏木精染色 10-------15分钟 自来水冲洗 3-------5分钟或者更长 伊红（曙红）复染色 3-------5分钟或者1---2 分钟 70%酒精 1-------2分钟 80%酒精 1------2分钟 95%酒精（1） 1------2分钟 95%酒精（2） 1-------2分钟 100%酒精（1） 1-------2分钟 100%酒精（2） 1--------2分钟 二甲苯（1） 5 二甲苯（2） 5 封片