高清原创中国药品检验标准操作规范2010年版化学药部分102升压素生物检定法.pdfVIP

升压素生物检定法 大鼠血压法 1 实验材料及用具 1.1 天平 精度0.01mg 或0.1mg 标准品或供试品称量用 精度1mg 试剂称量用 精度1g 大鼠称量用。 1.2 血压记录装置 记录仪或记纹鼓、球型汞血压计、压力传感器、描记杠杆和多导 生理记录仪等。 1.3 实验用具 大鼠固定板、注射器（1ml，精度0.01ml ）、小研磨器、容量瓶、吸管、 移液管、带塞三角瓶、带塞小瓶、硬质大试管（或三角瓶）附空心玻璃球（盖管口用）、小 漏斗、安瓿、电炉、水浴锅、脱脂棉、棉线、pH 试纸、滤纸、各种管径乳胶管。 1.4 手术用器械 手术剪、手术刀、手术缝合针、直镊、眼科直镊、眼科弯镊、止血 镊、动静脉夹及插管、气管插管。 1.5 试剂 氯化钠、冰醋酸、乌拉坦、肝素钠、（甲磺酸）酚妥拉明。 2 溶液配制 2.1 生理盐水 称取氯化钠适量，加水配成0.9%溶液。 2.2 0.25%醋酸溶液 量取冰醋酸适量，加水配成0.25%溶液。 2.3 25%乌拉坦溶液 称取乌拉坦适量，加水配成25%溶液。 2.4 肝素钠溶液 称取肝素钠适量，按每毫克标示效价（注射液按每毫升标示效价）， 加生理盐水配成1000U/ml 溶液。 2.5 甲磺酸酚妥拉明溶液 2.5.1 粉末 称取适量，加煮沸放冷并调节pH 为3.2 的水，配成1mg/ml 溶液。 2.5.2 注射液 用上述pH 为3.2 水稀释成1mg/ml 溶液。 2.6 标准品溶液 2.6. 1 割开标准品小管（注意勿使玻屑掉入）迅速精密称量，并记录读数，将管内粉末 置小研磨器中，称取空瓶中，以减量法计算得实际重量。 2.6.2 将称得的毫克数，乘以标示的每毫克升压素单位数，得总单位数。 2.6.3 精密加入0.25%醋酸溶液0.5ml，仔细研磨成匀浆。 2.6.4 将研磨器移至硬质大试管中，再精密补加0.25%醋酸溶液使成1.0U/ml 的溶液。 2.6.5 试管口轻放一空心玻璃球，将试管浸入沸腾的水浴中，沸水液面要超过试管内溶 液液面，时时振摇试管，准确加热煮沸提取5 分钟，取出迅速冷却至室温，用滤纸过滤。 2.6.6 滤液分装于安瓿中熔封，置4~8 ℃保存备用，如无沉淀析出，可在3 个月内使用。 2.7 标准品稀释液 2.7.1 实验当日取标准品溶液，放置至室温。 2.7.2 割开安瓿，精密量取标准品溶液适量，用生理盐水配成高低两个浓度，高低两浓 度之比值（r ）不得大于1:0.6，一般高浓度每1ml 含升压素0.1U 。调节给药量，使高剂量能 引起血压升高 5.3~6.7kPa （40~50mmHg ）。如高浓度给药量少于 0.3ml ，血压升高超过 5.3~6.7kPa 时，可将浓度降低，配成每1ml 中含升压素0.05U，低浓度亦相应降低。 2.8 供试品溶液与稀释液 按供试品的标示量或估计效价配制溶液。 2.8.1 粉末 按标准品溶液与稀释液的配制方法操作。 2.8.2 注射液 2.8.2.1 取供试品，放置至室温。 2.8.2.2 割开安瓿，精密量取适量溶液，加入容量瓶中，用0.25%醋酸溶液配成1.0U/ml 原创整理制作：清修散人；QQ ：2233291911 。 的溶液，然后同标准品溶液的稀释方法，配制稀释液。 3 实验动物 健康无伤，体重300g 以上的雄性大鼠。 4 检定法 4.1 麻醉动物和手术。 4.1.1 将动物称重。 4.1.2 按约0.4ml/100g 体重腹腔注射25%乌拉坦溶液，使麻醉。 4.1.3 动物麻醉后，仰卧固定于手术（板）台上（动物需保持体温）。 4.1.4 沿颈部正中线切开，分离气管、切口，及时吸出分泌物。 4.1.5 分离出一侧颈动脉，剥离附着的脂肪组织和神经，动脉底下穿二根线，靠远心端 一线将动脉结扎，近心端用动脉夹夹住。 4.1.6 将大鼠一后腿内侧皮肤纵向切一约 2~3cm 的小口，暴露股静脉，在近心端及远 心端以手术缝合针各穿上一线。先提起近心端的线头，由远心端向近心端推挤，使血管充盈 后结扎远心端，插入合适的静脉插管