外植体及消毒课件.ppt

外植体及消毒;上节课小结;植物组织培养室直观图;第一节、外植物体的选择;外植体基因型;外植体取材部位;取材部位选择基本原则： 在确定取材部位时，应考虑培养材料有来源有保证，易于再生、成苗。 对于培养较困难的植物在培养材料较多的情况下，宜比较各部位的诱导及分化能力，然后择优选择；对培养材料较少的呢？;外植体取材季节;外植体生理状态发育年龄;外植体大小;小结;灭菌和消毒的区别是什么？ 灭菌(Sterilization)：用物理或化学方法，杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体，即所有生命的物质全部杀死。 消毒(Sanitization)：杀死、消除或抑制部分微生物，使之不发生作用。 ;湿热灭菌法 干热灭菌法 除菌滤过法 辐射灭菌法 环氧乙烷灭菌法;灭菌(Sterilization);过滤灭菌;2、玻璃器皿灭菌 干热灭菌：160-180℃,1.5-2.0h 湿热灭菌：121℃, 15-20min 接种前用酒精棉球擦试，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌;3、接种工具灭菌 ◆用前干热灭菌：160～180℃,1.5～2.0h ◆用前湿热灭菌：121℃, 15～20min ◆接种前用酒精棉球擦试，浸入75%酒精液中，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。 ;4、实验服、口罩、滤纸灭菌 ◆湿热灭菌：121℃，15～20min ◆实验服灭菌后置于缓冲间或密封好。 ;5、接种室灭菌 紫外灯照射（接种室、超净台、接种箱）；波长260nm，距离小于1.2m，15～20min。 、臭氧灭菌机：1～2h 、熏蒸灭菌：2ml/m3甲醛 + 0.2g/ m3 高锰酸钾；冰醋酸；1～3%高锰酸钾或3%来苏儿。 、接种台喷雾消毒：75%酒精。 ;6、培养室灭菌 熏蒸灭菌： 2ml/m3甲醛 + 0.2g/m3 高锰酸钾 新建培养室用前一定要彻底熏蒸1次； 隔2-5天用洗衣粉水或来苏水拖地1次，用高锰酸钾擦架1次； 喷洒75%酒精灭菌降尘。 ;消毒(Sanitization)：杀死、消除或抑制部分微生物，使之不发生作用。 消毒是减少微生物数量，使之达到安全或相对安全的水平，而与使用规定和使用目的相符合。 消毒是消灭采自繁殖形态的细胞的活微生物的污染，但它不保证灭菌。 消毒和灭菌是不可互换的术语。;常见消毒剂的消毒效果一览表;消毒剂的选择;消毒剂九大特征;75％酒精(Alcohol)溶液(体积分数) 酒精渗???细菌体内使细菌蛋白质凝固，而被杀死。 75%效果最好，使用最多，因为75%能凝固蛋白质，但不会行成包膜，能杀死。 高浓度酒精与细菌接触后，使其表面凝固行成包膜，阻碍了酒精凝固其内部蛋白，不能彻底杀死； 当酒精浓度低了也起不到相应的效果。;75％酒精溶液配制及贮存 以配制一L 75%酒精为例。 1(L)*75%=95%*X，那么X=0.75/0.95=0.78947(L),即需要加入789.5(mL)95%的灯用酒精，同时加入210.5(mL)的三级水（配制培养基所用水）混合均匀即成。 为何选用95%酒精？ 贮存：密闭保存备用。原因何在？;75％酒精溶液的使用 乙醇具有较强的穿透力和杀菌力，在外植体消毒时常作为表面消毒的第一步，时间常为30-45秒，具有浸润和灭菌双重作用，需要结合其他药剂灭菌才能达到彻底灭菌的作用。;0.1%升汞溶液 升汞是有剧毒的重金属盐杀菌剂，原理在于Hg2+可与带负电荷的蛋白质结合，使菌体蛋白质变性失活。可有效杀死外植体表面的细菌和真菌芽孢，但需要无菌水冲洗5次以上，以清洗残留的汞。 注：1、灭菌后溶液，可倒回原液再次使用； 2、灭菌时间需要严格控制（原因）。 ;0.1%升汞溶液的配制和贮存 以配制500mL 0.1%升汞溶液为例 准确称取0.5g升汞,加入预热至90度的500mL三级水中，混匀溶解。 封闭贮存，置于角落并在瓶壁上标注危险品标志。;其它灭菌剂;前处理;第三节、外植体的接种——无菌操作;无菌操作技术分解;（4）上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后擦拭工作台面； 进入接种室前，操作人员的双手必须进行消毒，首先用肥皂水或洗手液洗净双手，及时剪除较长的指甲。 （5）先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；;（6）接种时，实验人员双手不能离开工作台，不能对着操作区说话、咳嗽和走动等； 戴上口罩、帽子，防止由呼吸、说话或咳嗽引起的污染；走动会带来“菌雾” 7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min，养成良好的操作习惯。 注：若连续外植体接种，每5天要大强度灭菌一次。 ;Detail is the Key of Success;养成“双手不从开盖瓶口等开放处划过