分子生物学14转录后的基因表达调控.ppt

五、转录后的基因表达调控 2. 加帽与聚腺苷酸化 （2）聚腺苷酸化（polyadenylation） poly(A)的周转（turnover） 细胞质中的聚腺苷酸化 爪蟾卵母细胞成熟过程中，有细胞质聚腺苷酸化发生，这种聚腺苷酸化需要有mRNA中的两段序列：聚腺苷酸化信号AAUAAA和AAUAAA上游（7 nt）的UUUUUAU（或高度相似序列），后者称为细胞质聚腺苷酸化元件（cytoplasmic polyadenylation element, CPE） Cytoplasmic polyadenylation element UUUUUAU and polyadenylation signal AAUAAA 五、转录后的基因表达调控 2. 加帽与聚腺苷酸化 （3）帽子与poly(A)对剪接的影响 帽子对剪接的影响 缺乏帽子会抑制第一个内含子的剪接 无甲基化的帽子（Gppp）对第一个内含子的剪接也有负效应 Production of capped and uncapped splicing substrates Effect of cap on splicing a substrate with two introns 五、转录后的基因表达调控 2. 加帽与聚腺苷酸化 （3）帽子与poly(A)对剪接的影响 帽子对剪接的影响 缺乏帽子会抑制第一个内含子的剪接的原因是由于帽子结合复合体（cap-binding complex, CBC）的作用 CBC由2种帽子结合蛋白（cap-binding proteins, CBPs）组成，若没有帽子或只有无甲基化帽子，则mRNA不能与CBPs结合，导致第一个内含子的剪接难以进行（剪接体难以形成） 五、转录后的基因表达调控 2. 加帽与聚腺苷酸化 （3）帽子与poly(A)对剪接的影响 poly(A)对剪接的影响 poly(A)能促进最后一个内含子（与poly(A)最接近的内含子）的剪接，而对其他内含子的剪接无甚影响 Effect of polyadenylation on splicing a pre-mRNA with a single intron Effect of polyadenylation on splicing a two-intron substrate 五、转录后的基因表达调控 Three cap structures 五、转录后的基因表达调控 2. 加帽与聚腺苷酸化 （1）加帽（capping） 帽子的合成 需要3种酶 核苷酸磷酸水解酶（nucleotide phosphohydrolase；又称RNA三磷酸酯酶，RNA triphosphatase） 鸟苷酸转移酶（guanylyl transferase） 甲基转移酶（methyl transferase） Cap synthesis RNA三磷酸酯酶 甲基转移酶 腺苷甲硫氨酸 鸟苷酸转移酶 五、转录后的基因表达调控 2. 加帽与聚腺苷酸化 （1）加帽（capping） 加上帽子的时间 在一些病毒中，转录起始后就马上加帽 有些病毒的转录与加帽并不偶联 在真核细胞中，加帽在转录早期进行（在RNA前体的长度达到30个核苷酸之前） 五、转录后的基因表达调控 2. 加帽与聚腺苷酸化 （1）加帽（capping） 帽子的功能 保护mRNA：一般的RNase不能切割含有3个磷酸基的帽子 提高翻译能力（效率）：通过与帽子结合蛋白结合，mRNA能更好地进入核糖体 有利于mRNA在细胞内的运输（运出细胞核）：若没有帽子，则mRNA基本上留在细胞核 使mRNA前体的能正确剪接：第一个内含子的剪接所需 Effect of cap on RNA stability Capped: m7Gppp Blocked: Gppp Uncapped Capping of U1 is necessary for its transport to the cytoplasm 五、转录后的基因表达调控 2. 加帽与聚腺苷酸化 （2）聚腺苷酸化（polyadenylation） 在mRNA（前体）3’端加上poly(A) poly(A)的长度：平均为250 nt 由poly(A)聚合酶 [poly(A) polymerase, PAP] 把AMP残基逐个地加到mRNA前体的3’端 一般都是在剪接前发生 五、转录后的基因表达调控 2. 加帽与聚腺苷酸化 （2）聚腺苷酸化（polyadenylation） poly(A)的功能 保护mRNA：延长其寿命（半衰期） 提高mRNA的翻译能力：能与poly(A)结合蛋白 [poly(A) binding protein I] 结合，促进翻译，促进mRNA与核糖体结合 Effect of poly(A) on tr