论文资料：Caco-2细胞模型及其应用的研究进展.docVIP

PAGE PAGE 6 Caco-2细胞模型及其应用的研究进展 王敏，齐云基金项目 基金项目：国家自然科学基金资助项目（No 作者简介：王敏，女，硕士研究生 *通讯作者：齐云，男，博士，研究员　Tel/Fax：（010E-mail:yunqichai@ （中国协和医科大学-中国医学科学院药用植物研究所，北京 100094） 摘要:目的 介绍近几年来Caco-2细胞模型在药学方面应用的最新进展。方法 依据近年来国内外相关文献资料，对有关Caco-2细胞模型自身及应用的发展进行了综述。结果与结论 Caco-2细胞模型本身的改良与优化及该模型应用于改善口服药物吸收、药食相互作用等方面的研究取得了可喜的进展，而将Caco-2细胞模型应用于中药吸收特点研究的动向值得关注。 关键词：Caco-2细胞模型；药物吸收；药食相互作用；中药 Caco-2细胞(the human colon adenocarcinoma cell lines)模型作为药物吸收研究的快速筛选工具，可在细胞水平上提供药物分子透过小肠黏膜的吸收、分布、代谢、转运以及毒性的综合信息。由于Caco-2细胞与体内药物，特别是那些被动吸收的药物具有良好相关性，已被广泛用于药物早期快速筛选过程中，并已成为研究药物吸收机制，预测体内吸收和药物相互作用等的重要工具。近年来研究者们对模型不断进行改进，在应用上也有诸多发展，本文将就近年这些研究动态进行综述。 1 对Caco-2细胞模型的优化研究 尽管Caco-2细胞模型具有诸多优点，但仍然存在某些缺陷，如形成完全分化并具有紧密连接的单层细胞生物膜所需培养时间较长（21～28天）；缺乏分泌黏液的功能，不似小肠上皮能够形成黏液层；缺少或低表达某些药物代谢酶和转运体等。研究者们因此就这些缺陷对模型本身进行了一些改进。 Chong S等 [1]选用Biocoat肠上皮细胞分化环境（BIEDE）来培养Caco-2细胞，优化了细胞培养条件，仅用3天即培养出完全分化的单层细胞膜，缩短了细胞培养时间。该模型采用polyethylenet-erealate代替非聚碳酸酯作为细胞生长支持物（滤膜材料）；用纤维胶原Ⅰ型代替鼠尾胶原Ⅰ型作为促进细胞黏附的细胞外蛋白基质（滤膜涂层）；用丁酸代替含10％胎牛血清的DMEM作为培养基。 小肠的吸收作用与粘液层的存在密切相关。小肠上皮粘液层的形成，取决于HT29细胞（杯状细胞）分泌粘液的能力，与其相比，Caco-2细胞为单一细胞，缺乏分泌粘液的能力，从而无法形成与小肠上皮相似的粘液层，此外，由于HT29细胞的缺失，使得Caco-2细胞的旁路渗透能力也低于体内状态，为使Caco-2细胞模型具有与小肠上皮相似的粘液层，并获得与体内相似的细胞旁路渗透能力，Constanze等[2]将Caco-2细胞与HT29－MTX按不同比例共培养，结果发现，TEER值（ 跨膜电阻值）较单用Caco-2细胞有所降低，而且水溶性小分子物质经共培养细胞模型的渗透能力高于单纯的Caco-2细胞模型，有利于水溶性小分子物质细胞转运过程的研究。 由于Caco-2细胞缺少某些首过代谢酶，而这些酶是影响药物口服吸收和生物利用度的关键酶，Charles等[3]利用重组技术在Caco-2细胞中引入CYP cDNAs，从而提高了CYP3A4和CYP2A6的表达，开拓了Caco-2模型在研究药物首过代谢方面的应用，提高了其体内相关性。由于Caco-2细胞缺少或低表达小肠上皮细胞内的某些药物代谢酶和转运体，因此，有人采用经典的细胞生物学方法诱导药物代谢酶的表达，结果发现，在各种酶诱导剂如苯巴比妥、地塞咪松、β-萘黄酮存在下培养Caco-2细胞的亚克隆细胞，可诱导表达不同的酶系统[4]。如Caco-2细胞的亚克隆TC7细胞经诱导后可增加CYP3A的表达，且高表达与刷状缘相关的水解酶、蔗糖－麦芽糖异构酶，以及牛磺胆酸转运系统；经β-萘黄酮诱导可表达CYP1A1基因亚家族，以及高活性的UPD－葡萄糖醛酸转移酶。这些性质使TC7细胞成为有价值的体外肠道研究模型。另外，有研究发现Caco-2细胞在多孔膜上与100nM 1α,25-二羟维生素D3共培养2周后可诱导Caco-2细胞内CYP3A4 mRNA的表达，与重组技术一样也能形成一个用以研究药物小肠吸收首过效应的细胞模型[5]。 2 Caco-2细胞模型在改善口服药物吸收研究中的应用 2.1 各种药物吸收促进剂的开发研究 2.1.1 亲水性药物及多肽类药物往往表现出低的口服生物利用度，一个重要原因就是肠上皮细胞的紧密连接使得这些药物经细胞旁路的被动扩散受到限制。最近几年，研究者们致力于开发能够调节肠上皮细胞紧密连接（但不破坏细胞单层完整性）从而增加肠通透性的