复和修复医学知识宣讲课件.ppt

复和修复医学知识宣讲;I consider molecular biology to be the study of genes and their activities at the molecular level, including transcription, translation, DNA replication, recombination and translocation.;分子生物学在分子水平上研究 核酸与蛋白质的功能;分子生物学发展简史;兼顾“假说导向”与“发现导向” 的科学研究方法;医学分子生物学的研究主题是健康与疾病的分子机制;分子生物学在医学领域的应用;单个抑癌基因的突变即可导致肿瘤的发生;重组蛋白技术用于药物生产;这些金色的转基因大米里含有 b-胡萝卜素, 食用这种大米可以预防维生素A缺乏症。;RFLP技术在法医学中的应用; DNA的合成及重组 DNA Biosynthesis and Recombination;DNA生物合成;基因组复制的主要特点 The General features of Genome Replication ;一、基因组是细胞或病毒全部遗传信息的总和 ;核基因组;人类基因组（Genome）;人类染色体的RxFISH图谱;基因;;人类基因组各成分所占比例;二、基因组DNA复制具备一些共同特征;;Meselson-Stahl实验;2. DNA复制的生长点形成复制叉;3. DNA复制是双向复制;4. DNA复制是半不连续复制;两个原因造成了DNA的半不连续复制： DNA双链是反向平行的； DNA合成的方向只能是5’-3’。 在一条模板上，DNA能进行连续的合成，DNA聚合酶简单地尾随着复制叉，此模板所指导合成的新DNA链称为前导链。 在另一条模板上，DNA聚合酶与复制叉做反向运动，此模板指导合成的是后随链。 后随链上形成的新链DNA片段，称为冈崎片段。;5. 复制起点有特殊的结构; GATTNTTTATTT ··· GATCTNTTNTATT ··· GATCTCTTATTAG ··· ;真核生物有多个复制起始点;真核生物复制起始点的结构;6. DNA复制需要引物;7. 复制需要多种酶和蛋白因子的参与;8. 基因组复制是高保真的;三、不同基因组DNA通过不同的模式 进行复制;DNA复制过程 Process of DNA Replication;一、细菌的DNA复制;E.coli 复制起始点 oriC;E.coli DNA复制起始和复制叉的形成 ;在E.coli复制起始过程中，DnaA、DnaB/C（解螺旋酶）、DnaG（引物酶）和DNA聚合酶III依次加入，形成最初的复制叉。 DNA聚合酶催化的复制反应 复制叉上的DNA合成;（一）DNA聚合酶催化的复制反应;DNA复制反应的底物是 dNTP和引物-模板连接处;;与DNA聚合酶???合的金属离子催化核苷酸的添加;DNA聚合酶能分辨正确与错误的碱基;DNA聚合酶能分辨dNTP与NTP;DNA聚合酶具有延伸能力;外切核酸酶活性校正新合成的DNA;（二）复制叉上的DNA合成;;RNA引物的合成与去除;原核与真核生物RNA引物的合成;RNA引物的去除;RNase H可去除DNA:RNA杂交链中的RNA； DNA聚合酶（ E.coli中是DNA聚合酶 I，真核生物中目前认为是DNA聚合酶 ? 或 ?）填补去除引物后留下的空隙（gap）； DNA连接酶连接两个相邻的核苷酸。;在复制叉上有多种蛋白质协同解开双螺旋;解螺旋酶解开DNA双螺旋;E.coli的解螺旋酶是DnaB蛋白，它本身是六聚体，又与六个DnaC蛋白共同组成解螺旋复合物； 人类的解螺旋酶目前认为是Mcm2-7复合物，同样是六聚体； DnaB解螺旋方向为5’-3’，即结合后随链的模板。;单链结合蛋白使单链DNA稳定;拓扑异构酶除去解螺旋时产生的超螺旋;解链过程中正超螺旋的形成;拓扑异构酶Ⅰ;拓扑异构酶的作用机制;本图显示拓扑异构酶 II 除去由复制叉所产生的正超螺旋： 通过“断裂-再连接”的方式，将未复制的DNA的一部分通过未复制区域的断裂点以消除正超螺旋。 该反应使连环数减少2，因此每复制20bp将会发生一次。;复制叉酶扩大了DNA聚合酶的底物范围;DNA聚合酶是高度特化的;;延伸能力差，只能延伸20个核苷酸左右。 功能：切除引物，填补冈崎片段间的空隙、DNA损伤的修复。;323个氨基酸; 2个核心酶（?、?、? 3种亚基） 1个?复合物（?、?、??、?、?、? 6种亚基） 可滑动的DNA夹子（含1对?-亚基）;?亚基有聚合酶活性 ?亚基有3’-5’校正核酸酶活性 ?亚基协助核心酶固定在DNA模板上 ?