蛋白免疫印迹法Westernblot原理和步骤课件.pptVIP

蛋白免疫印迹法Westernblot原理和步骤;Western Blot的原理;SDS原理;Western blot 内容;步骤;;2，电泳 向电解槽中加入适量的Running Buffer,将蛋白样品以50ug的标准换算出的体积进行上样。以电压120V或160V进行电泳，电泳至前沿跑至最底端即可进行转膜。 转膜 用硝酸纤维素膜（NC膜），进行转膜。组装转膜“三明治”的过程在Transfer buffer中进行：黑的一面在下，依次放上滤纸、凝胶、NC膜、滤纸，然后合上三明治。整个过程必须保证无气泡。接着把转膜“三明治”放入转膜槽中，注意正负极放置正确。倒入适量的Transfer buffer。在冰浴中进行转膜。转膜条件：120V,1.5h或者150V，1h 封闭 转膜结束后，取出NC膜，按照所需蛋白的位置，裁剪NC膜。使其浸润于封闭液中，缓慢摇荡1h;;