Biotage快速制备色谱讲义.docVIP

Biotage快速制备色谱仪的使用及样品成分的分离 实验目的： 学习掌握Biotage快速制备色谱仪的原理及使用操作 了解Biotage快速制备色谱仪器的结构 学习利用Biotage快速制备色谱仪对混合样品的分离 实验原理： 利用样品混合物中各组分理、化性质的差异，各组分程度不同的分配到互不相溶的两相中。当两相相对运动时，各组分在两相中反复多次重新分配，结果使混合物得到分离。 两相中，固定不动的一相称固定相；移动的一相称流动相。固定相是固体吸附剂，吸附剂是多孔性微粒物质表面有吸附中心。样品组分与流动相竞争吸附中心。各组分的吸附能力不同，使组分在固定相中产生保留时间不同和实现分离。 制备色谱法其目的在于分离制备一种或多种纯组分，用于进一步的定性鉴定、化学合成或制备高纯标准物。可分为工业用大规模制备纯物质的生产制备色谱和实验室分离几毫克至几克样品，以便鉴定色谱图中未知峰的小型制备色谱。实验室制备色谱除了用柱色谱外还有制备薄层色谱。制备色谱法可以完成一般分离方法难以完成的纯物质制备，如纯化学试剂、合成中间体、蛋白质的纯化等。 仪器与试剂： 仪器，Biotage快速制备色谱仪； 2，试剂，苯甲醛，邻氯苯甲醛，环己烷，乙酸乙酯 实验步骤： 打开系统电源开关，启动仪器； 当进入主界面后，点击 Chemistry； 点击 Lamp On。紫外灯需要 7.5 分钟的预热时间； 选择右下角 Solvents 界面，给需要使用的溶剂指定相应的溶剂进口，至少两种溶剂； 进入方法编辑界面（Method tab），点击 New 或者 Open 以建立方法。 在参数编辑 Parameters 界面，选择溶剂体系，柱子 cartridge 的大小以及收集架子的类型。流速 flowrate是默认的，输入完点击 OK； 在收集方式 Collection 界面，选择紫外检测器的波长，collection wavelength 为命令收集波长，monitor wavelength 为检测波长（可观察化合物在此波长条件下的吸收情况），两种波长范围皆为 200～320nm，输入完点击 OK； 选择收集模式 collection mode，里面共有六种收集模式，最常用的为 CollectAll 全收集,Threshold 域 值收集一般设置为 50mAU，manual 手动收集，其它三种不常用。推荐 Threshold 域值收集，输入完点击 OK； 最后为 RackAllocation 试管收集架设置，仪器标配 Rack Type 116×150aluminumBLK-016，DispenseOrder 为机械臂走动模式，Max Fraction Volume 为试管最大收集体积，按默认值就可以，输入完点击OK； 在梯度编辑 Gradient 界面，检查洗脱梯度，可以直接在梯度图上进行拖动修改； 如果需要保存方法设置，点击 Save； 然后点击 Run 就可以自动过柱了。 五，注意事项： （1）确保所有管路接通完好 （2）选择合适的柱子及展开剂 （3）及时添加洗脱剂，防止仪器无溶剂工作，以免影响仪器使用寿命。 （3）Biotage快速制备色谱仪系精密贵重仪器，在未熟悉仪器的性能及操作方法之前，不得随意拨动主机的各个开关和旋钮。 （4）仪器在开、关机时必须严格按照操作方法进行。