免疫胶体金技术(转).pptVIP

片材： 不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了产品的货架期。 吸收垫(Absorbent Pad)： 提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸收纸； 吸收纸的作用： 主要表现在控制样品的流速，促进虹吸作用以及使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。 研究和应用 胶体金法检测HEV-IgM 胶体金法检测TB-Ab(双抗原夹心法) THANKS AND BLESSING * 免疫胶体金技术Immune colloidal gold technique 胶体金标记技术的相关定义 免疫胶体金技术 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗 体的一种新型的免疫标记技术。 胶体金标记 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。 胶体金技术的发展Development of Immune colloidal gold technique 1939-----雏形 Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察金离子呈高电子密度。 1971------作为标记物应用于免疫组织化学研究 Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原。 1974------实现间接免疫金染色法 Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上，实现了间接免疫金染色法 胶体金技术的种类及优点 快速免疫金渗滤法(immuogold filtration assay ,IGFA) 即穿流式(flow through)的固相膜免疫测定。 主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜，标记结合物为免疫金。 A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒 免疫层析法( immunochromatogra-phy，ICA) 是继IGFA之后发展起来的另一种固相膜免疫测定，与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同，免疫层析法中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于层析作用的横流 （lateral flow） )向另一端移动。移动过程中被分析物 与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被分离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体金为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。 免疫胶体金技术的特点 优点： 检测方法简单而快速，数分钟即可得出结果； 不需仪器设备，操作人员不需特殊训练； 试剂稳定，适用于单份测定； 无污染。 GICA的特点是单一试剂，一步操作。小型实验室即有条件开发生产。 干燥包装的试剂可在室温保存一年以上。?? 成为目前“病人身边检验”（point-of-care testing，POCT）中广为应用的方法。 最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其精密度和准确性均符合定量测定要求。 不足： 金免疫测定中应用的是单份试剂，难于进行质量控制。即使是同一批生产的试剂，也很难保证每个试剂的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。 其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料的开发与应用。 Colloidal Gold Synthesis Solution color varies extensively with particle size Usually a deep red, but also dark brown/purple to light orange/yellow Colloid size can be controlled by Au:Citrate ratios Anywhere between 1nm - 100nm + Citrate is easily substituted by other more Au-philic molecules (i.e thiols) H2O, 100OC H2AuCl4 Cit- Cit- Cit- Cit- Turkevich, et. al. Discussions Faraday Soc. 1951, No. 11 55-75. P