第六章 分子发光-荧光磷光及化学发光.ppt

仪器分析的分类 3.光分析方法 分子发光 — 荧光、磷光及化学发光 Fluorescence Phosphorescence and chemiluminescence 6.1 分子发光的基本原理 6.2 分子荧光和磷光的影响因素 6.3 荧光（磷光）分光光度计 6.４荧光分析法的应用 6.５化学发光分析法 6.1 分子发光的基本原理 第一次记录荧光现象的是16世纪西班牙的内科医生和植物学家N.Monardes，1575年他提到在含有一种称为“Lignum Nephriticum”的木头切片的水溶液中，呈现了极为可爱的天蓝色。 直到1852年，Stokes在考察奎宁和叶绿素的荧光时，用分光光度计观察到其荧光的波长比入射光的波长稍微长些，才判断这种现象是这些物质在吸收光能后重新发射不同波长的光，而不是由光的漫射作用所引起的，从而导入了荧光是光发射的概念，他还由发荧光的矿石“萤石”推演而提出“荧光”这一术语。 1867年，Goppelsroder进行了历史上首次的荧光分析工作，应用铝—桑色素配合物的荧光进行铝的测定。 19世纪以前，荧光的观察是靠肉眼进行的，直到1928年，才由Jette和West提出了第一台荧光计。 分子的活化与去活化 ２. 单重态与三重态 分子的活化与去活化 ３．振动弛豫 当分子吸收光辐射后可能从基态的最低振动能层跃迁到激发态的较高的振动能层上去．然而，在液相或压力足够高的气相中分子间碰撞的几率很大，激发态分子可能将过剩的振动能量以热的形式传递给周围的分子，而自身从高振动能层失活到该电子能级的最低振动能层上，这一过程称为振动弛豫．发生振动弛豫的时间为10-12s数量级． ４．内转换 内转换指的是相同多重度等能态间的一种无辐射跃迁过程．当两个电子能级的振动能层间有重叠时，则可能发生电子由高能层以无辐射跃迁方式跃迁到低能层的电子的激发态．内转换过程在10-13~10-11s时间内发生，它通常要比由高激发态直接发射光子的速度快得多． ５．外转换 激发分子通过与溶剂或其他溶质间的相互作用和能量转换而使荧光或磷光强度减弱甚至消失的过程称外转换．这一现象称为“熄灭”或“猝灭”． 　自较低的激发单重态及较低的三重态的非辐射跃迁可包含外转换，也可包含内转换． ６．系间跨跃 系间跨越指的是不同多重度状态间的一种无辐射跃迁过程．它涉及受激电子自旋状态的改变．如S1到T1，使原来两个自旋配对的电子不再配对．这种跃迁是禁阻的，但如果两个电子能态的振动能层有较大的重叠时，如图中激发单重态S1的最低振动能层与激发三重态T1的较高振动能层重叠，则可能通过自旋－轨道耦合等作用使S1态转入 T1态的某一振动能层． ７．荧光、磷光发射 从单重态到三重态的分子系间跨越跃迁发生后，接着发生快速的振动弛 豫而到达三重态的最低振动能层上，当没有其他过程同它竞争时，在10-4~10s左右时间内 跃迁回基态而发生磷光．由此可见，荧光与磷光的根本区别是：荧光是由第一电子激发单重态最低振动 能层至基态各振动能层的跃迁产生的，而磷光是由第一电子激发三重态的最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的． （2） 分子的活化与去活化 RLS ３． 金属螯合物的荧光 ４．荧光的熄灭 1 激发光源　荧光测量中所用激发光源一般比吸收测量中的光源强度大，通常采用汞弧灯、氢灯或氙灯． 　 3检测器　荧光的强度很弱，因此要求检测器有较高的灵敏度．一般用光电管或光电倍增管作光电元件。 4试样液池　荧光测量用的液池通常用石英制成，形状以正方形或长方形为宜，也有用圆形的。 荧光强度与透过光强度相比小得多，因此在测量荧光时必须严格消除透过光的影响。在测量荧光的仪器中，是在与入射光和透过光相垂直的方向上来测量荧光。 利用这类仪器可方便地获得荧光激发光谱和荧光发射光谱。荧光激发光谱主要用于选择激发光波长。 荧光定性和定量分析 1．荧光分析法的特点 （1）灵敏度高 与紫外-可见分光光度法比较，荧光是从入射光的直角方向检测，即在黑背景下检测荧光的发射。 （2）选择性强 荧光法既能依据特征发射，又能依据特征吸收来鉴定物质。 （3）试样量少和方法简便。 （4）提供比较多的物理参数 ． 　　　 荧光分析法的缺点是它的应用范围还不够广泛．另一方面，由于荧光分析的灵敏度高，测定时对环境因素敏感，干扰因素也较多． 目前荧光分析大多用于定量测定． 应用 荧光光谱法主要应用于元素的荧光测定。以形成荧光配合物进行荧光分析的元素目前已达60余种，其中铍、铝、硼、镓、硒、镁以及某些稀土元素常用荧光法进行测定．可采用荧光猝灭法测定的元素有氟、硫、氰离子、铁、银、钴、镍等。 紫外-可见分光光度计测量池(吸收池) 紫外-可见分光光度计测量池(吸收池) 6.５ 化学发光分析