【微生物检验】食品中细菌总数的测定.ppt

注意英文表述 菌落总数aerobic bacterial count大肠菌群coliform bacteria沙门氏菌salmonella致泻性埃希氏菌diarrheogenic escherichia coli霉菌和酵母molds and yeasts金黄色葡萄球菌staphyloc 菌落形成单位colony form unit 微生物学检验 microbiological examination 讨论1 真菌菌落算不算菌落总数？（请学生比较新老国标中关于菌落的定义的差异） 讨论2 新国标上菌落总数计算公式上n 分别代表什么？ （n1 ——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数（含适宜范围菌落数）n2 ——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数（含适宜范围菌落数） 讨论3 成片的菌落如何计数？ 讨论4 对原始记录表的评价 设计原始记录表 记录表 按照以下原则进行编制：⑴可以满足检验过程的复现；⑵可以实现培养基和试剂的溯源及复现其制备过程；⑶一页原始记录基本包括该样品的多个常规检验项目，也就是一份样品的所有微生物检验项目在一张原始记录上体现。为了符合实验室资质认定评审的要求，可能会有点繁，而且基本上没有办法对原始记录作假，因为记录上体现的内容环环相扣。 * * 1、检验程序 检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入460C左右适量营养琼脂→培养48小时→报告菌落数 第一节 菌落总数测定 2、检样处理 （1）以无菌操作将检样25g（或25ml）剪碎，放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨制成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min~100000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。 （2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序,制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。 （4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培养基(可放置在46±10C水浴锅内保温)注入平皿15ml~20mL，混合均匀.同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）0C恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目,乘以倍数，即得每g（每mL）样品所含菌落总数。 3、菌落计算方法 （1）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 （2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。 ②稀释度的选择 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字。 若所有稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报告 菌落数在100以内时，按其实有数报告;大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。 菌落总数的测