启动子克隆方法研究进展.docVIP

PAGE PAGE 1 启动子克隆方法研究进展 随着 \o 标题中含有基因的文章 基因工程的发展，常常需要构建一种能高水平表达异源蛋白质的表达载体。启动子对外源基因的表达水平影响很大，是基因工程表达载体的重要元件。因此研究启动子的 克隆方法，对研究基因表达调控和构建表达载体至关重要。 迄今为止，国外尚未见到有关启动子 克隆方法的综述性报道，国内仅孙晓红等曾就启动子的结构、分类、 克隆方法和食用菌中已经分离到的启动子作过综述。而近年来又有许多改进的 克隆启动子的方法获得了多方面的成功，本文就近年来改进的启动子克隆方法作一综述，以期促进对启动子分离技术的应用。 1　启动子克隆的几种方法 1.1　利用启动子探针载体筛选启动子 　　启动子探针型载体是一种有效、经济、快速分离 \o 标题中含有基因的文章 基因启动子的工具型载体，包含2个基本部分：转化单元和检测单元。其中，转化单元含复制起点和抗生素抗性基因，用于选择被转化的细胞；检测单元则包括1个已失去转录功能且易于检测的遗传标记基因以及克隆位点。 　　利用启动子探针载体筛选启动子的过程为，先选用1种适当的限制性核酸内切酶消化切割染色体DNA，然后将切割产生的DNA限制片段群体与无启动子的探针质粒载体重组，并按照设计的要求使克隆的片段恰好插在紧邻报告 \o 标题中含有基因的文章 基因的上游位置；随后再把重组混合物