紫外可见分光光度法培悼渭紫外可见分光光度.pptVIP

第13章 紫外可见分光光度法; 目录 ;*;*;*;电磁波谱;*;*;*;*;*; n ? ?* 跃迁 所需能量小于? ? ?*跃迁（150-250 nm） 若饱和烃中的氢原子被氧、氮、卤素等原子或基团所取代， 由于这些原子中含有n电子，可以发生n ? ?* 跃迁 摩尔吸光系数比较小，一般在100-3000 L / mol cm;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;　　利用被测物质的分子对紫外-可见光具有选择性吸收的特性而建立的分析方法。;单色光：只具有一种波长的光。 混合光：由两种以上波长组成的光，如白光。;;;2、吸收光谱或吸收曲线;300;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;光度计的基本结构;*;*;*;狭缝;*;*;单光束仪器;单光束仪器的缺点： 操作麻烦： ;双光束仪器;双光束仪器的特点和不足： 测量方便，不需要更换吸收池 补偿了仪器不稳定性的影响 实现了快速自动吸收光谱扫描 不能消除试液的背景成分吸收干扰;双波长仪器;;消除光谱重叠干扰 A?1 = Aa ?1 + Ai ?1 A?2 = Aa ?2 + Ai ?2 Ai ?1 = Ai ?2 ?A = A?1- A?2 = Aa ?2 - Aa ?1 =（?a?1 -?a?2）bCa;双波长仪器能否消除背景干扰？ ;则 ?A = lg I1/ I2 =（? ?1 -? ?2）bC 因此测量两波长 吸光度之差，就 消除了背景吸收 的干扰。 ;显色反应及显色条件的选择;*;显色条件的选择;吸光度测量条件的选择;*;*;*;*;*;*;*;*;*; 六、仪器操作 一、定性分析 ;?-胡罗卜素;二、定量分析 1. 单组份定量方法 1）标准曲线法(职业卫生检测中常用)： 用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与待测组分相同的条件下，测量吸光度，用吸光度对样品浓度绘制标准曲线标准曲线的斜率即为绝对校正因子。在测定样品中的组分含量时，要用与绘制标准曲线完全相同的条件测量吸光度，然后根据吸光度在标准曲线上直接读出样品组分的浓度。 2）标准对比法： 该法是标准曲线法的简化，即只配制一个浓度为cs的标准溶液，并测量其吸光度，求出吸收系数k，然后由Ax=kcx求出cx 该法只有在测定浓度范围内遵守L-B定律，且cx与cs大致相当时，才可得到准确结果。;二、岛津UV2550定量分析步骤（标准曲线法） 先开主机，然后再打开UVPROBE软???； 启动UVPROBE以后，点击界面下方“连接”进行仪器连接，仪器进行连接检查，待检查全部通过后，点击“OK” 点击“光度测定”； 点击“方法”，波长设定为通过光谱检测到所测样品的最大吸收波长,然后加入波长，类型多选择为“多点”，WL1=最大波长。 点击“下一步”，（注：根据所测样品对相应的参数进行设定），“方法”设定完后，点击“关闭”； 将两个空白参比放入光束吸收池架； 点击“自动调零”； 双击标准表中的任意位置激活标准表，在表头位置将显示激活；;点击下拉菜单中的I-扣空白； 在标准表中依次输入标准系列ID； 读取标准样品：将两个空白参比放入光束吸收池架，点击“自动调零”，然后放入样品，输入样品浓度，依次进行“读取”。样品的浓度读取完后，在“标准曲线”表中点击“右键”-“属性”中选择“方程式”、“相关系数”，查看标准曲线； 样品读取：点击样品表中的任意位置激活标准表，在表头位置将显示激活； 在样品表中输入样品ID，放入待测样品，进行“读取 ”。 打印结果：点击文件-打印-（选择打印标准表或样品表） 关机：点击操作界面“断开”，然后关闭仪器电源，关闭操作软件，关闭电脑，将比色皿倒扣放置保存。;单组分的测定曲线法; 七、仪器维护保养 一、环境要求 １、使用工作温度：15～35℃，湿度：45～80%，如果温度高于30℃，则湿度必须小于70% ２、避免日光直射 ３、避免震动（轻拿轻放） ４、避免强磁场，电场 ５、远离腐蚀性气体，并避免置于任何可能导致紫外区吸收的含有机/无机试剂气体的区域 ６、避免脏污、多尘环境;二、工作台要求 １、可承受压力 35Kg+25Kg（PC） ２、最小尺寸 ：长：1120mm，宽：710mm，高：520mm 三、电源要求 １、供电电压：100/120/220/230/240V 交流±5% 50/60Hz ２、功率消耗：约190VA ３、保险丝使用：100 - 120V供电，5A ；220-240V供电，3.15A