鸡B鄄FA分子中结合Ii链功能片段特性的研究.pdf

喻丹丹等摇 鸡B鄄FA分子中结合Ii链功能片段特性的研究 摇 第10期 ·1413 · doi:10.3969/ j.issn.1000鄄484X.2016.10.002 鸡B鄄FA分子中结合Ii链功能片段特性的研究淤 喻丹丹摇 吴摇 琼摇 罗兰芳摇 余为一摇 陈芳芳 (安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室,合肥 230036) 摇 摇 中图分类号摇 S852郾4摇 摇 文献标志码摇 A摇 摇 文章编号摇 1000鄄484X(2016)10鄄1413鄄06 [摘摇 要]摇 目的:研究鸡Ii链结合的B鄄FA分子的功能片段及其特征。 方法:将克隆的B鄄FA 基因片段(琢1琢2、s琢1琢2 和 琢3TC)分别插入原核或真核表达质粒,然后分别转染或与Ii共转染工程菌E郾coli(BL鄄21)或293T细胞,经过诱导表达、亲和层 析纯化和SDS鄄PAGE鉴定后,分别用Pull鄄down法观察B鄄FA片段与Ii结合与在细胞内的共定位特征。 结果:首先,构建了3个 重组原核表达质粒和4个重组真核表达质粒。 原核表达的B鄄FA片段经亲和层析纯化可获得单一蛋白分子。 其次,用Pull鄄 down从共转染工程菌表达的蛋白分子中分别检测到Ii/ B鄄FA鄄琢1琢2 和Ii/ B鄄FA鄄s琢1琢2,而未能检测到Ii与琢3TC 的结合物,而 免疫印迹结果也表明该两片段是结合Ii链形成复合物的功能片段。 最后,在真核表达的293T 中,B鄄FA鄄琢1琢2具有同B鄄FA相 同的细胞定位特性。 结论:鸡B鄄FA鄄琢1琢2片段是结合Ii 的功能片段,并保持了B鄄FA 的细胞定位的作用。 本研究结果首次提 供了B鄄FA分子与Ii 的互相作用的实验依据。 [关键词]摇 恒定链;B鄄FA片段;Pull鄄down;表达;复合物 Research of functional segments of chicken B鄄FA molecule binding with Ii chain YUDan鄄Dan,WU Qiong,LUO Lan鄄Fang,YU Wei鄄Yi,CHEN Fang鄄Fang郾Key Laboratory of Zoonoses of Anhui Province,AnhuiAgricultural University,Hefei230036,China [Abstract] 摇 Objective:To research the functional segments of B鄄FA molecule binding invariant chain and their characters郾Methods:The DNA segments (琢1琢2,s琢1琢2 and 琢3TC) of B鄄FA genes were respectively cloned and inserted into prokaryotic or eukaryotic expression plasmids,then they were singly or co鄄transfected with Ii gene into the engineering bacteria E郾coli (BL鄄21)or293T cells郾After induction of expression,affinity chromatography and SDS鄄PAGE identification,the binding between B鄄FA segments and Ii molecule and co鄄localization in cellswereobservedwith Pull鄄down andWesternblot郾Results:First threerecombinant prokaryotic expression plasmids andfour recombinant eukaryotic expression plasmidswere constructed郾The single molecules expressed by B鄄FA segmentswere observed after an affinity chromatography郾Secondly the complexes of Ii/ B鄄FA鄄琢1琢2 and Ii/ B鄄FA鄄s琢1琢2 were detected by a Pull鄄down from the co鄄transfect