ⅢBⅣ期非小细胞肺癌中医寒热分型说与EGFr-TKI耐药的相关性研究.docxVIP

广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明： 广州中医药大学学位论文原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工 作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人 或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均 已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签 日期：沙Ⅸ年 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向 国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中 医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者 文导师签名删蟹 日期： 摘 摘 要 目的： 1．临床部分：应用临床流行病学观察性研究方法，通过观察ⅢB／Ⅳ期NSCLC患者 EGFR—TKI治疗前后中医寒热证候的演变规律及耐药时的中医证候特点，验证EGFR—TKI 的药性，探讨中医寒热证候与EGFR—TKI治疗疗效的关系，进一步为研究中药逆转 EGFR-TKI耐药提供药物选择的理论依据。 2．实验部分：通过观察不同治则中药复方(清热、温阳)联合吉非替尼对EGFR-TKI 耐药细胞株增殖、凋亡的影响，探索其可能的作用通路，筛选出哪种治则的中药复方 可以达到增敏作用，以进一步佐证靶向药物的寒热属性，为中药联合靶向药物发挥增 敏作用提供理论基础。 方法： 1．临床部分：应用流行病学观察性研究方法，采集新发或复发初治ⅢB／Ⅳ期NSCLC 并准备接受EGFR-TKI治疗患者的中医四诊资料，根据中医理论进行寒热辨证分型， 定期随访并采取四诊资料至EGFR-TKI耐药(即肿瘤进展)，建立数据库，探讨EGFR—TKI 治疗前后寒热证候的演变规律及耐药时的中医证候特点。 2．实验部分：以人肺腺癌EGFR—TKI耐药细胞株A549、H1650为研究对象，用吉 非替尼分别联合温阳、清热中成药进行干预，利用MTT法检测联合药物对细胞增殖的 影响，利用流式细胞仪检测联合药物对细胞凋亡的影响，通过western blot法探讨 其作用可能的机制。 结果： 1．临床部分： (1)患者的吸烟史、病理类型差异有统计学意义(PO．05)。 (2)整体分析表明，接受EGFR-TKI治疗后大部分患者的证型发生由寒转热的改 变，治疗前31．4％为热证，68．6％为寒证，随着服药时间的增加，寒证患者的比例逐步 下降，热证患者的比例不断上升，达到耐药这一截点以热证患者居多(76．2％)。 (3)分层分析表明，耐药时证型与治疗前、服药1个月后的证型差异有统计学意 义(尺0．05)，耐药时证型与服药3个月、6个月后的证型差异无统计学意义(乃O．05)。 (4)年龄、是否吸烟、性别因素对耐药时间影响差异无统计学意义(PO．05)。 (5)服药前热证的患者中位PFS为1．9个月，初始寒证患者中位PFS为5．267个月， 初始寒热证候对于疗效(PFS)差异无统计学意义(乃0．05)。 2．实验部分： (1)A549细胞：吉非替尼联合参附注射液后，对细胞增殖差异无统计学意义(乃 0．05)，金正均Q值法得出两药仅有相加作用(0．85Q1．15)，对细胞的凋亡率差异 无统计学意义(乃0．05)。吉非替尼联合清开灵注射液后，对细胞增殖差异有统计学 意义(尺0．05)，但Q值法显示两药联合后仅有相加作用(0．8501．15)，细胞的凋 意义(尺0．05)，但Q值法显示两药联合后仅有相加作用(0．8501．15)，细胞的凋 亡率差异有统计学意义(P(O．05)，其作用通路尚未发现。 (2)H1650细胞：吉非替尼联合参附注射液后，对细胞增殖差异无统计学意义(乃 0．05)，金正均Q值法得出随着时间推移，两药由相加作用逐渐变为拮抗作用(48H- 0．85Q1．15，72H：00．85)，对细胞的凋亡率差异无统计学意义(乃O．05)。吉非 替尼联合清开灵注射液后，对细胞增殖差异有统计学意义(尺0．05)，Q值法显示两 药有协同作用(Q1．15)，细胞的凋亡率差异无统计学意义(尺0．05)，其作用机制 可能是通过下调EGFR、p-ERK信号通路传导实现的。 结论： 1．接受EGFR-TKI治疗后大部分患者的证型发生由寒转热的改变，即随着服药时 间的增加，寒证患者的比例逐步下降，热证患者的比例不断上升，达到耐药这一截点 以热证患者居多，推断EGFR-TKI的药性为热性。 2．服用EGFR—TKI前患者寒热证型与疗效(PFS)无相关性，但初始寒证患者有 一定获益倾向性。 3．对于A549细胞，吉非替尼联合参附