AnabaenaPCC7120中异形胞的发育与DNA复谁制协调关系的机制研究.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文题目： 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文题目：Anabaena PCC 7120中异形胞的 学位级别 博士 所在学院 生命科学技术 发育与DNA复制协调关系的机制研究 (系) 学院 学科专业 微生物学 导师姓名 张承才 学生姓名 魏新元 学位论文 否 如需保密，解密时间 年 月 日 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．-9我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意． 研究生签名：凄砝新抽 时问：抛r年，口月2善日 学位论文使用授权书 本人完全了解“华中农业大学关于保存．使用学位论文的规定”。即学生必须按 照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电 子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印．缩印或扫描等复制手段保存．汇 编学位论文．本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表，传播学位论 文的全部或部分内客． 注：保密学位论文在解密后适用于本授权书． 学位论文作者签名：袁勉新列导师签名：牌，舾cs-e 3 签名日期：Ⅵ丐年p月谚日 签名日期：．i卯r年／／月掣日 摘 摘 要 蛋白内含子(内含肽，intein)广泛分布于多种多样的生物体中，包括真细菌， 古细菌和真核生物。在蓝细菌中存在着许多的蛋白内含子(内含肽)，其中，许多已 经在体外对其进行了生物化学的研究。但是，没有证据表明在蓝细菌细胞体内蛋白 内含子(内含肽)的切除。在丝状体的鱼腥蓝细菌菌株Anabaena sp．strain PCC 7120 中，DNA聚合酶m中的Q亚基，复制因子DnaE，由两个分离的开放阅读框架(ORF) 所编码，这两个开放阅读框架分别位于Anabaena PCC 7120染色体上的两条链上， 并且彼此相距约3．1 Mbp，每个开放阅读框架中包含了一个蛋白内含子．(内含肽)。 该生物能进行细胞发育过程形成能进行固氮作用的细胞，即异形胞。异形胞是一种 末端分化的细胞，在异形胞中细胞周期被终止．DNA复制过程是细胞周期过程中的 关键步骤．既然DnaE是DNA复制过程中非常关键的成分，它也可以说是细胞周期 中的关键蛋白，因此，我们希望能在蓝细菌中找到蛋白内含子(内含肽)能够在细 胞内发生剪接的实验证据，并且确定成熟的DnaE蛋白是否在异形胞中依然存在． 在本研究中，我们证实了由两个开放阅读框架(ORF)编码DnaE蛋白可以通过蛋 白质反式剪接作用连接起来形成完整的DnaE蛋白。更有趣的是，我们第一次在蓝 细菌体内检测到了蛋白质的反式剪接，这个发现使我们可以将异形胞和营养细胞中 成熟DnaE蛋白的形成进行比较，结果显示，成熟的DnaE蛋白可以在两种细胞类型 中形成。通过将两个分离的基因的启动子序列与咖报告基因构建转录水平上的融 合克隆，也证实了两个基因在营养细胞和异形胞中都进行了转录，并且发现在异形 胞的分化过程中，转录水平没有很大的变化。尽管异形胞是末端分化的细胞，不能 进行染色体的复制，但是DnaE在异形胞中的表达和成熟可能在DNA复制之外过程 中担负一定的功能，如DNA的重组和修复。 DnaA是DNA复制起始蛋白，它在细胞周期中担负着必需的功能。因此我们也 有兴趣对其在不同的细胞类型中的表达进行检测。实验结果显示DnaA的表达在细 胞的发育过程中具有波动性，这可能意味着DnaA可能还有其它的功能，或在前异 形胞还有表达。DnaA的温度敏感型突变体已经在大肠杆菌和链霉菌中获得，它有利 于获得同步生长的培养物．本研究也尝试通过定点突交在Anabaena PCC 7120中筛 选温度敏感型菌株，以便于考察细胞周期和异形胞分化之间的关系。温度敏感型突 变体也是研究基因功能的好材料。初步筛选显示一些单交换的菌株出现对39℃温 度敏感。 关键词：彳n口施鲫二sp．stain PCC 7120；蛋白内含子(内含肽)；异形胞；细胞周期： DNA复制：温度敏感型；同步培养物。 Abstract Abstract Protein intein is widespread in a variety of organisms．Several intein elements are also present in cyanobacteria，and some of them have been studied biochemically i