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DNA重组技术前言 第一节 常用的工具酶 工具酶(Tool enzymes)： DNA重组技术，需要利用一些酶在体外对 DNA进行切割、连接等基因操作，这些酶常被称 为工具酶。 主要工具酶 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 逆转录酶 DNA聚合酶Ⅰ 碱性磷酸酶 末端转移酶 Taq DNA聚合酶 一、限制性内切酶(restriction endonuclease,RE ) 1.简称限制酶，是DNA重组技术的基本工具 2.能识别和切割双链DNA分子特异序列的核酸水解酶 3.在细菌体内与相伴存在的修饰酶（甲基化酶）共同构成细菌的限制－修饰体系，起限制外来DNA、保护自身DNA的作用 1.I型限制酶属于复合功能酶，兼有修饰和切割DNA两种特性。 功能 核酸内切酶甲基化酶ATP酶DNA解旋酶 特点： 识别和切割位点不一致 没有固定的切割位点 随机切割 不产生特异片段  （1）酶活力单位 限制性内切酶活力单位规定如下：在合适温度、pH值和离子强度等条件下，1小时内完全消化1μg特异DNA底物所需的酶量，定义为一个活力单位。 （2） 星号活性 限制性内切酶在非标准反应条件下，对识别序列的特异性下降，能切割一些与特异识别顺序类似的序列，一般在酶的右上角加*表示。 如克隆过程中需同时进行双酶切，应选用二种