实验二槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素.docxVIP

实验二 槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素 一、概述 植物来源 ：槐米系豆科植物槐树（ sophora japonica L. ）的花蕾（槐米） ，芦丁含量高达 12%~20%。 荞麦中含量也较高。含芦丁成分的植物高达 70 种以上。 功效：芦丁经药理实验证明具有调节毛细血管渗透作用，具有维生素 P 样作用。在临床上用作毛细 血管止血药，常作为高血压病的辅助用药。芦丁为槐米中主要有效成分。 主要化学成分的结构及理化性质： 芦丁（ Rutin ）也称芸香苷，是槲皮素 3 位上的羟基与芸香糖脱 水缩合形成的苷 ( 芸香糖为葡萄糖与鼠李糖组成的双糖 ) 。分子式： C27H30O16· 3H2O，淡黄色针状结晶，含 三分子结晶水，熔点 174～178℃ , 无水物为 188~190℃。易溶于碱液，显橙黄色，酸化后又析出。在冷 水中的溶解度为 1： 10000，热水中为 1：200，在冷乙醇中为 1： 650，在热乙醇中为 1：60，在吡啶中 1：12。微溶于乙酸乙酯和丙酮，难溶于苯、三氯甲烷、石油醚等极性小有机溶剂，可溶于硫酸和盐 酸，加水稀释又可析出。 UV EtOHmax ： 259， 299， 359nm。芦丁用 20%HSO4 水溶液水解可得槲皮素（芦丁 的苷元），呈黄色结晶， 313～314℃， C15H10O7· 2H2O，在热乙醇中溶解度为 1： 23，冷乙醇中 1： 290， 难溶于水和苯等极性小的有机溶剂，可溶于极性较大的有机溶剂如甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。 UV EtOHmax ： 255，269sh,301sh,370nm 。 其他成分理化性质： 皂苷（ saponin ）粗品为白色粉末， m.p.210 ～ 220℃。易溶于吡啶。能溶于 200 倍的甲醇，酸水解后获得两种苷元（白桦酯醇、槐花二醇）及糖（糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄糖醛 酸内酯）。白桦酯醇（ betulin ）无色针晶， m.p215～ 217℃ , 能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、 三氯甲烷、苯等；难溶于石油醚。槐花二醇（ Sophoradiol ）无色针晶， m.p219～ 220℃或 224℃，溶于 石油醚、苯、丙酮、甲醇，难溶于水。芦丁和槲皮素结构式如下所示。 OH HO O OH OH HO O OH OH OO H2 OH OH O OC OH O CH 3 OH O OH OH OH OH 芦丁 MW664.6 ( 含三分子水 ) 槲皮素 MW338.3 （含二分子水） 1 实验部分 （一）实验目的要求 1.制备芦丁，供药用。 2.通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。 3.掌握黄酮苷水解制备黄酮苷元的方法。 4.熟悉重结晶技巧。 5.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。 （二）实验的基本原理 芦丁的提取原理 利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提 取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法） 。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。 芦丁的分离原理 利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解 度小，芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后就能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离） 。也可采用醇 -水法进行精制。 芦丁的鉴定原理 （ 1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。 （ 2）通过专属的化学显色反应，确定芦丁的成分类型（黄酮类） 。 (三) 实验内容 1. 用酸碱法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。 2. 在酸性条件下加热回流水解芦丁，制备槲皮素。 3. 溶剂重结晶纯化芦丁和槲皮素。 4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁和槲皮素 (四) 实验药材仪器与试剂 实验药材 槐米 20g。 仪器：500ml 烧杯， 1000ml 烧杯， 250ml 园底烧瓶、 100ml 量筒、 50ml 量筒、 100ml 锥形瓶、 50ml 锥形瓶、研钵、减压过滤装置，布氏漏斗，层析缸等。 试剂：硼砂、氧化钙、HCI 、 H2SO4、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸等。 （五）实验方法与注意事项 芦丁的提取 1）方法一（碱溶酸沉法）称取槐米粗粉 20g，在研钵中研碎后放入 500ml 烧瓶中，加 0.4%硼砂水溶液 200ml ，用加热磁力搅拌器 加热微沸后， 加石灰乳 （1.5g 氧化钙加入 10ml 水研成乳液） 调 PH8~9 ， 一边加一边搅拌，加热微沸 30min ，补充失去的水分，并保持溶液 PH8~9，静置约 5 分钟过滤（或趁热 抽滤），药渣（第二次提取）再用 0.4%硼