细胞凋亡和细胞自噬课件.ppt

细胞凋亡的检测 针对凋亡不同阶段特征的检测方法 1． 早期检测 PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测  细胞内氧化还原状态改变的检测  细胞色素C的定位检测  线粒体膜电位变化的检测 2． 晚期检测  TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase- mediated dUTP nick-end-labeling）  LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)  Telemerase Detection (端粒酶检测) 3．mRNA水平的检测  针对不同位置的凋亡特征的检测方法 细胞凋亡的形态学检测方法 凋亡细胞的光学显微镜和倒置显微镜观察 凋亡细胞的荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜观察 凋亡细胞的电子显微镜观察 细胞膜相关凋亡检测 线粒体相关凋亡检测 胞浆蛋白相关凋亡检测 Caspase(半胱天冬氨酸酶)活性检测 凋亡相关的非Caspase蛋白酶检测 胞浆其他蛋白活性检测 细胞核相关凋亡检测 其他 细胞凋亡的检测方法简述 一、细胞凋亡的形态学检测 二、磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法） 三、 DNA片断化检测 四、 TUNEL法 五、 Caspase-3活性的检测 六、 WB检测 Morphology of Apoptotic Cell 凋亡诱导剂诱导人肺癌细胞株A549发生凋亡，hoechst 33258染色 DNA fragmentation and the appearance of “DNA ladder” ①Bcl-2亚家族：抑制细胞凋亡的发生，结构上拥有保守的BH1～BH4的结构域和跨膜区, BH1与BH2结构域是抗凋亡蛋白必备的结构域，同时在同源或异源性二聚体和离子通道 的形成中发挥重要的作用，主要包括Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-W和Mcl-1等； ②Bax亚家族：促进细胞凋亡，结构上缺乏BH4结构域，只含BH1～BH3和跨膜区，包括 Bax、Bak、Bok； ③BH3亚家族：促进细胞凋亡，结构上仅具有1个保守的BH3同源结构域，主要包括Bad、 Bim、Bid和Bik等。 Structure and Function of Bcl-2 Family Proteins Valentijn AJ, Biochem Soc Trans. 2004;32(Pt3):421-5 Bcl-2 family-mediated apoptosis Antiapoptotic members: BCL-2, BCL-XL, A1, MCL-1, etc. Proapoptotics: BID, BAD, BIM, BIK, BMF, NOXA, PUMA, etc. Models for interaction between BH3-only proteins, BAX/BAK-like proteins and pro-survival BCL-2-family members in signalling in apoptosis. Strasser A.Nat Rev Immunol. 2005;5(3):189-200. Small molecules convert anti-death factors into pro-death factors nature chemical biology 2008 12(4):722 Inhibitors of apoptosis proteins (IAPs) IAP (XIAP, c-IAP-1, c-IAP-2, Survivin, Livin): to bind with pro-caspase and inhibit the activation of caspases; IAP inhibitors： Smac/DIABLO (second mitochondria-derived activator of caspase/direct IAP-binding protein with low pH), to bind with IAPs and activate caspase-9 Omi/HtrA2 Structure of BIR domain-containing IAPs Riedl SJ, Nat Rev Mol Cell Biol. 2004;5(11):897-907. BIR一般由80个氨基酸残基构成,全称为杆状病毒IAP重复序列( baculoviral IAP repeat),为IAP 抑制细胞凋亡所必需的，也