免疫诊断简要概述.pptVIP

免疫荧光法 磁珠分离法 淘选法 流式细胞术 抗原肽－MHC分子四聚体tetramer 免疫磁性微球的分离原理 直接法对细胞进行分类 抗CD3磁球 磁球结合T细胞 加入B和T细胞中 负向选择 正向选择 磁架进行分离 间接法对T细胞进行分离 单克隆抗体CD3 羊抗鼠修饰磁球 Biomag T细胞 T细胞 二、白细胞功能测定 T细胞功能测定 B细胞功能测定 吞噬细胞功能测定 T细胞功能测定 T细胞增殖试验：MTT法 细胞毒试验 细胞因子检测 细胞免疫功能检测的皮肤试验 结核菌素试验 51Cr释放法 乳酸脱氢酶释放法 凋亡细胞检查法 琼脂糖电泳 TUNEL法 流式细胞术 免疫诊断简要概述 抗原抗体反应的原理和特点 抗原抗体发生结合反应的物质基础——抗原决定基与抗体的抗原结合部位之间的结构互补性。 抗原抗体反应的特点 1.高度特异 2.可逆性 3.可见性：适当浓度和比例、盐离子 Ag/Ab Reactions Source: Li, Y., Li, H., Smith-Gill, S. J., Mariuzza, R. A., Biochemistry 39, 6296, 2000 :85/chime2/lyso-abfr.htm Ab Ag High Affinity Ab Ag Low Affinity 亲和力（Affinity） Ab excess Ag excess Equivalence – Lattice formation 凝集反应 沉淀反应 补体参加反应 免疫标记技术 第一节 抗原或抗体的检测 Agglutination 颗粒性抗原（如细菌、细胞）与相应抗体, 在适当电解质存在的条件下, 经过一定时间后出现肉眼可见凝集块称为凝集反应 Y Y Y + ? 定性实验 Ag /Ab 间接凝集实验 可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的载体上,使之成为致敏载体颗粒,然后与相应抗体或抗原作用,在电解质参与下出现的凝集反应 Y Y Y + ? 应用 检测可溶性抗原或抗体 Coombs (Antiglobulin)Tests 检测血清中抗-Rh抗体 Y Y Y Y Y Patient’s Serum Target RBCs + ? Step 1 + ? Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Coombs Reagent (Antiglobulin) Step 2 凝集抑制实验 将可溶性抗原与相应抗体预先作用,然后再加入致敏颗粒（吸附相同可溶性抗原的乳胶颗粒）, 由于抗体已被可溶性抗原结合, 因而致敏颗粒不发生凝集现象。如免疫妊娠实验 Y Y Y + ? Prior to Test Y + ? Y Y + Test Patient’s sample 单向免疫扩散 Ag Concentration Diameter2 Ag Ag Ag Ag Ab in gel 双向免疫扩散 补体结合实验 已知抗原加入血清（检测抗体） 加入标准量补体 加入包被抗体的红细胞 检测红细胞溶解量 Ag Y Y Patient’s serum Y Y Y Y Y Y Y Y Ag No Ag Ag  免疫酶技术 免疫荧光法（immunofluorescence) 免疫印迹法（western blotting) 放射免疫测定法(RIA) 直接荧光法 Ag Y Fluorochrome Labeled Ab Tissue Section 间接荧光法 Ag Y Y Fluorochrome Labeled Anti-Ig Tissue Section Unlabeled Ab Flow Cytometry Flow Tip Laser FL Detector Light Scatter Detector Flow Cytometry Flow Cytometry Red Fluorescence Intensity Green Fluorescence Intensity Two Parameter Histogram Green Fluorescence Intensity Number of Cells Unstained cells FITC-labeled cells One Parameter Histogram ELISA 双抗体夹心法 双抗原夹心法 生物素－亲和素系统 酶联免疫斑点试验（ELISPOT） 免疫组化技术 ELISA 双抗体夹心法（HBsAg、HBeAg等）示意图 固相载体 抗体 抗原 酶 抗体 酶标记抗体 1.将抗体包被在固相载体上。 2.如样品中含有抗原，则结合 为抗原抗体复合物。 3