第三节基因工程的基本操作程序1.pptVIP

基因工程的基本操作程序 （1）目的基因的获取 （2） （3）将目的基因导入受体细胞 （4）目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 1、什么是目的基因? 2、怎么获取目的基因？ （一）从基因文库中获取目的基因 1.基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因组文库的构建模式图 （2）反转录法（cDNA文库的构建方法） 以目的基因转录成的 为模板，在反转录酶的催化下反转录成互补的单链DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA，即 ，从而获得所需的基因。 真题演练 （2012海南）已知甲种植物因受到乙种昆虫危害而减产，乙种昆虫食用某种原核生物分泌的丙种蛋白后死亡。因此可以将丙种蛋白质的基因转入到甲种作物体内，使甲种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力。据此，回答下列问题： （1）为了获得丙种蛋白质的基因，在已知丙种蛋白质的氨基酸序列的基础上，推测出丙种蛋白的（ ）序列，据此可利用（ ）方法合成目的基因。获得丙种蛋白质的基因还可以利用（ ）和( )方法。 * 基因表达载体的构建 主要指的是编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 （1）从基因文库中获取目的基因； （2）利用PCR技术扩增目的基因； （3）通过DNA合成仪用化学方法直接合成 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （cDNA文库） 基因组文库与部分基因文库的关系 通过对 受体菌 的培养而储存基因 mRNA cDNA 基因组DNA文库 cDNA文库 基因组DNA文库与cDNA文库的比较 基因组文库和部分基因文库的比较 物种间基因交流 基因多少 基因中内含子 基因中启动子 文库大小 基因组文库 cDNA文库 文库类型 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 思考： 如何从基因文库中得到所需要的基因？ 依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列； 基因的功能； 基因在染色体上的位置； 基因的转录产物mRNA； 基因翻译产物蛋白质等特性。 注意： 基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌，菌中含基因。 （二）利用PCR技术扩增目的基因 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术。 ②原理：__________ 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 过程： 变性、退火、延伸三步曲 变性：加热至90～95℃双链DNA解链成为单链DNA 退火：冷却至55～60℃部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合 延伸：加热至70～75℃以目的基因为模板，合成互补的新DNA链 变性 退火 延伸 模板DNA 95℃ PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 50℃ 引物1 引物2 DNA引物 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 引物1 引物2 DNA引物 72℃ Taq酶 Taq酶 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 72℃ 第1轮结束 第2轮开始 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 95℃ 50℃ 72℃ Taq Taq Taq Taq PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 72℃ 第2轮结束 PCR的基本反应步骤 变性 90-95?C 延伸 70-75?C 退火 55-60?C PCR总结： ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术。 ③前提条件：_______________________； 原料：___________、___________ 、 __________________、 ________________。 ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 DNA引物 热稳定DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 模板DNA 思考？ 1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次， 理论上至少需要几个引物？ 2×（2n-1）(n为循环次数) （24-1）×2=30 PCR技术扩增与DNA复制的比较 结果 酶 场所 解旋方式