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FLP/FRT 系统 TUNEL法 — DNA片段化与检测 TUNEL法 — DNA片段化与检测 * * * ph causes non-autonomous overgrowth in mosaic eyes 主要技术手段： ★ MARCM技术 ★ TUNEL法 MARCM技术 如果想在嵌合体中敲除基因， 用FLP/FRT系统 如果想在嵌合体中增加基因表达， 用UAS/Gal4系统 UAS/Gal4系统 GAL4/UAS系统是一种转基因体系。 原理：利用特定的启动子或增强 子，以组织特异性的方式激 活酵母转录激活子GAL4的表 达，GAL4又以同样的方式引 起GAL4反映元件（UAS）-靶 基因的转录。 GAL4 UAS UAS/Gal4系统 果蝇含有四对染色体，每对染色体中的一条被称为同源染色体，分别来自于母本和父本。 在正常的细胞分裂中，一对同源染色体总是能忠诚地复制，然后分配到新分裂的细胞中 FLP是一个来自酵母的染色体重组酶 FRT则是FLP催化的一段DNA序列 同源重组产生会两个子细胞中， 一个含有双份正常染色体，令一个含有双份突变染色体。 如果我们在正常染色体上添加标示（GFP），那么，可以在果蝇组织中观察突变细胞的表型变化 如果两条染色体中的一条是正常的，而另一条基因被突变掉， 那么对于绝大部分没有重组的细胞来说，它们是“杂合体”。 FLP/FRT 系统 MARCM 技术 (mosaic analysis with a repressible cell marker ) 同源染色体重组 非同源染色体组合 GAL80 UAS/GFP/mutation 突变细胞 细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的过程，染色体DNA首先在核酸内切酶作用下，随机切断； 在核小体单位之间被随机切断。形成180-200bp核小体式片段； DNA双链断裂出现缺口即可产生一系列DNA的3’-OH末端，被染色。 增加细胞膜通透性 TdT 酶和荧光素标记 的dUTP进入细胞 在TdT酶的辅助下dUTP与凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端结合 HRP标记的抗荧光 素抗体特异结合 HRP底物，H2O2发生氧化、环化反应，形成棕褐色 显微镜下观察 TUNEL法 — DNA片段化与检测