疫苗临床前研究指导原则.pptVIP

原始细胞库（Primary?Cell?Bank，PCB）：一定量经过充分鉴定的人、动物或其他来源的细胞；源自单一组织或细胞分装于容器内，组成应均一，冻存于-13O℃或以下，其中一支（瓶）或多支（瓶）可用于制备主细胞库（Master?Cell?Bank，MCB）。?  主细胞库（Master?Cell?Bank，MCB）：经过充分鉴定一定量的人、动物或其他来源且保存适宜的细胞，一般是由原始细胞库（Primry?Cell?Bank）的细胞制备而成，分装于容器内，组成应均一，保存于-13O℃或以下，通常用于制备工作细胞库（Working?Cell?Bank，WCB）。 工作细胞库（Working?Cell?Bank，WCB）：由有限传代水平的主细胞库制备而来的均一性细胞悬液，分装适宜体积于多个容器中，适当保存，常冻存于-13O℃或以下，其中一支（瓶）或多支（瓶）可用于生产。所有容器处理相同，其中一支（瓶）或多支（瓶）一旦由贮存库中移出后，不得返回原种子贮存库中。实际上，细胞种子是通过亚培养扩增至一定代次（或适宜的群体倍增数）后，由制造单位选定并由国家药品管理当局批准。此细胞合并后分装于安瓿，并低温保存为WCB。?  （三）疫苗原液生产工艺的研究1．生产工艺的主要技术参数的确定（1）病毒与细胞的接种比例、病毒感染复数 （MOI：multiplicity of infection，含义是感染时病毒与细胞数量的比值 ）的最佳参数、细胞培养和病毒培养的最佳温度、培养时间和收获时间。菌毒种的接种量，培养和发酵条件等技术参数的研究确定； （2）灭活剂的选择和依据； （3）灭活或裂解条件及灭活或脱毒效果的验证，灭活效果验证的依据、方法；灭活效果的验证，应采用尽可能敏感的细胞或培养基和方法进行；  灭活是指破坏病原体的生物学特性，但尽可能避免影响其免疫原性或破坏血清中补体活性的过程。常用的灭活剂有甲醛、β-丙内酯(BPL)或其他有效灭活剂。 甲醛是一种有强烈刺激性的致癌物质。其既可作用于病毒含氨基的核苷酸碱基，又可作用病毒壳蛋白。作用于病毒壳蛋白时，易使蛋白质发生交联或病毒颗粒聚集，不能再作用于壳蛋白内的核酸。这样，病原体蛋白的抗原性会遭到严重破坏，并可能有病原体存活；用甲醛灭活时间长，一般需要在37-39℃处理24h以上或更长时间。并且灭活的效果易受温度、pH、浓度、是否存在有机物、病原体的种类和含氮量等因素影响，在研究中应引起注意；残留的游离甲醛，若随疫苗注入机体后，会产生制激性反应。 β-丙内酯(BPL)在国外已广泛用于各种疫苗的灭活。它是一种杂环类化合物(C3H4O2)，沸点155℃，常温下是无色粘稠状液体，对病毒具有很强的灭活作用。它作用于病原体DNA或RNA，改变病毒核酸结构达到灭活目的，而不直接作用于蛋白。 （4）原液的浓缩和/或活性抗原的提取纯化等工艺研究：纯化和提取工艺中各种条件进行优化，纯化和提取工艺对抗原活性成分是否影响，应建立稳定的纯化工艺，包括纯化时的回收率、抗原活性和纯度等的稳定性；并制定相应的质控指标和检测方法，按GMP要求在符合GMP要求的生产环境下生产；（5）初步确定起始投料、原液、半成品和成品的产出比的理论数据。 原液（Bulk）：系指用于制造最终配制物（Final?formulation）或半成品（Final?Bulk）的均一物质。由一次或多次单一收获物而得到，一般需要纯化并可能配制一批或多批半成品。如属微生物，通常视为原悬液（Bulk?Suspension）。如原液已浓缩，经稀释成为半成品。对于多价制品（如三价脊灰疫苗），原液是由单价原液配制而成。? 2．疫苗对佐剂的要求目前能用于疫苗的佐剂多为氢氧化铝，而铝佐剂通常使疫苗产生的抗体滞后，且增加注射局部的副反应几率。如疫苗的抗原能满足免疫的需要，则不加佐剂为宜。 佐剂是非特异性免疫增强剂，当与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。 佐剂有很多种；例如氢氧化铝佐剂、短小棒状杆菌、脂多糖、细胞因子、明矾等。弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂是目前动物试验中最常用佐剂。弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。 如果在终制品中使用佐剂，则对以下问题应进行研究，对于已经明确有佐剂效应或者已经商品化的佐剂，只需提供该类制剂的组分或化学组成，国内外使用该类制剂的情况，无需再进行毒理和安全性研究。若国内外均未使用过该类佐剂,则必须对其作用原理、安全性及佐剂效应进行详细的研究并建立切实可行的评价方法。 （四）疫苗的配方研究应对疫苗的配方进行研究，如疫苗中添加的