扫描电镜及其制样技术课件.pptVIP

（2）干燥的方法 3）冷冻干燥法 特点：在干燥过程中由于不形成液-气界面， 所以由表面张力引起的样品变形和损 伤大为减少，因此干燥效果较好。 缺点：冷冻过程有可能形成冰晶损伤。 图3-1 冷冻干燥法技术流程 （2）干燥的方法 4）临界点干燥法 ① 临界点干燥的原理（图3-2） 图3-2 临界点干燥原理图 临界点干燥的原理之小结 临界状态的条件：密闭容器中的液体加热达到一定的温度（临界温度）。 临界状态的特性：气、液密度相等，相界消失；液体变成气体，液体的表面张力消失为零；无论施加多大的压力，气体不会变成液体。 临界点干燥：利用临界状态下液体表面张力被消除的特性，使样品中的液体气化而最后完全干燥。 ② 临界干燥液的选择——置换液与中间液 置换液：在临界点干燥器内起临界干燥 作用的液体称为置换液(表2)。 表2 某些液体的临界特性 中间液：醋酸异戊酯 名 称 水 乙醇 氟里昂 液体CO2 临界温度(℃) 374 243 28.9 31.5 临界压力(kg/cm2) 218.5 63 38 72.8 ③ 临界点干燥器的主要结构（图3-3 ） 图3-3 HCP-2型临界点干燥器 扫描电镜及其制样技术 扫 描 电 镜 技 术 扫描电镜（Scanning Electron Microscope，SEM） 是继光镜和透射电镜之后发展起来的一种电镜，用于观察物质表面及断面的三维形貌结构和进行微区成分分析。 一、扫描电镜的基本结构与成像原理 1、 SEM基本结构及其作用 （１）电子光学系统　 电子枪：阴极、阳极、栅极。 阴极—通电加热后产生电子束。 阳极—加速电子束。 栅极—控制和会聚电子束流 。 电磁透镜：会聚电子束，形 成直径5~10纳米的电子束（即电子探针），照射于样品上 。 图1-1 扫描电镜工作原理图 （２）检测系统 ①二次电子的来源及作用 在样品表面以下几纳米到几十纳米的区域，被入射电子（初级电子、一次电子）所激发出来的样品原子中的外层电子，称谓二次电子（次级电子）。 SEM通常是由二次电子所形成的图象来显示生物样品的表面形貌。 （２）检测系统 ② 二次电子检测系统的组成及作用 组成：检测器（二次电子探头）、光电倍增管、视频放大器。 作用：对二次电子进行收集、放大和处理，以调制显像管栅极电压并成象。 图1-1 扫描电镜工作原理图 （３）电子偏转系统（扫描系统） 组成：扫描发生器、扫描线圈。 作用：使镜筒和显像管内的电子束分别进行同步光栅状扫描，最后在显像管的荧光屏上显示出完整图象。 图1-1 扫描电镜工作原理图 2、影响图象形成的因素 （1）倾斜角效应 —— 二次电子成像原理 ∵ 二次电子产率主要取决于电子束的入射角，而入射角又主要取决于样品的倾斜程度。 ∴ 样品的倾斜角效应是影响图象反差的主要因素。 ∴ SEM图象的反差主要是由样品表面的凹凸状态决定的，越是凸出的部位产生二次电子的数量越多，图象越明亮，反之则较暗。 图1-2 样品倾斜对二次电子产率的影响 2、影响图象形成的因素 （2）原子序数效应 原子序数效应：样品内原子序数不同的元素，在图象上也会形成一定的亮度差异，这种现象称为原子序数效应。 对策：观察生物样品时，在样品表面喷镀一层原子序数高的金属膜，可提高图象质量。 2、影响图象形成的因素 （3）充放电效应 充电：当初级电子轰击干燥的生物样品表面时，会因其导电性能差而发生电荷积累的充电现象，并对随后到来的初级电子产生排斥，使电子散开，且导致二次电子发射轨迹偏斜或杂乱。 放电：轰击区内电子堆积，与邻近区域间产生电位差，则可产生放电打火现象。 充放电效应：上述充、放电状况造成图象忽明忽暗或模糊不清等现象，称为充放电效应。 对策：采用金属镀膜、导电胶粘贴样品等导电处理，可减少充放电效应的影响。 图1-4 血细胞充放电效应图例 二、扫描电镜的特点 （一） 图 谱 （二）扫描电镜的特点 观察表面形貌。 图象景深大，富有立体感。 放大范围广，分辨率较高：放大倍数为数10倍~数10万倍；分