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学案 【实验目的】 按照基因工程的基本操作程序，用P质粒载体上的抗潮霉素（HPT）基因替换稻瘟菌基因组中的Ｍ基因，实现M基因敲除。 【实验原理】实验原理是从实验选材到过程及结果检测的依据，这个地方要说全。我试试啊，这块儿知识储备有限，所以最后还得是你把它说全。基因同源重组法敲除基因也叫基因打靶，如果两个基因两端的碱基序列相同 实验原理是从实验选材到过程及结果检测的依据，这个地方要说全。我试试啊，这块儿知识储备有限，所以最后还得是你把它说全。 基因同源重组法敲除基因也叫基因打靶，如果两个基因两端的碱基序列相同我们称之为同源序列，利用同源序列可以发生下图所示的同源重组，同源重组在细胞中自然发生，交叉互换的位点必须发生在特定的同源序列中。故人工条件下可以把外源片断整合到活体细胞DNA的同源序列中，使某个基因被取代，被换下来的基因被破坏而失活或降解。可以根据 检测是否被基因敲除 应用基因同源重组法敲除基因可以研究某一基因的功能。同源重组在细胞中自然发生，交叉互换的位点必须发生在特定的同源序列中。 同源重组原理示意图 【实验材料】 稻瘟菌野生型P131 基因组 P质粒基因结构示意图 【实验方案】 获取目的基因的方法： 哪段作为目的序列？方法？ 构建基因表达载体 工具酶（具体）： 构建的过程（示意图表示）： 步骤1： 步骤2： 步骤2步骤1 步骤2 步骤1 将目的基因导入受体细胞： 最初的受体细胞： 最终的受体细胞： 目的基因的检测和鉴定 （1）目的基因的初步检测： PCR方法检测目的基因选用的引物组合分别为： M基因敲除体的基因组序列 （2）导入目的基因的检测方法？ 稻瘟菌野生型P131 基因组 哪个样品是敲除掉M基因的？ 【作用机理】 资料3：顶体结构是真菌的菌丝顶端的一个动态结构，它与菌丝的极性生长有关。FM464是一种内吞性染料，它可以进入顶体，从而证明内吞囊泡参与了顶体囊泡的积累。用该染料同时对野生型和敲除体的顶端进行染色观察，结果如下图所示。请根据如下结果说明M基因的作用机理。