质粒是基因工程中最常用的运载体新人教.pptVIP

基因工程简介 基因工程概念 别名： 操作环境： 水平： 对象： 过程： 结果： 关键步骤一：目的基因从细胞内提取 关键步骤二：目的基因与运载体 DNA拼接 关键步骤三：目的基因进入受体细胞 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。 DNA连接酶的作用过程 质 粒 质粒的特点 细胞染色体外能自主复制的小型环状DNA分子； 质粒是基因工程中最常用的运载体； 存在于许多细菌及酵母菌等生物中； 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒； 质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 质粒的存在对宿主细胞无影响； 基因操作的基本步骤 提取目的基因 将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。 提取目的基因的方法（一） 直接分离基因——鸟枪法 提取目的基因的方法（二） 人工基因合成法 目的基因与运载体结合 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 将目的基因导入受体细胞并扩增 基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌和动植物细胞等。 导入受体细胞常用的方法是借鉴细菌或者病毒侵染细胞的途径。通常还要对一些受体细胞进行增大通透性的处理(用氯化钙处理细菌使细胞壁透性增大)。 目的基因可以随着受体细胞进行快速的繁殖，在很短的时间内获得大量的基因。 目的基因的检测和表达 前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。这样，处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 小 结 * 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外(对DNA剪切和拼接 ) DNA分子水平 基因 剪切——拼接——导入——表达 产生出人类所需要的基因产物 工具：基因的剪刀——限制性内切酶 工具：基因的针线——DNA连接酶 工具：基因的运输工具——运载体 返 回 粘性末端 粘性末端 返 回 运载体条件： 能在宿主细胞内复制并稳定地保存。 具有多个限制酶切点。 具有某些标记基因 常用的运载体种类： 质粒、噬菌体、动植物病毒 返 回 提取目的基因 目的基因与运载体结合 将目的基因导入受体细胞 主 页 目的基因的检测和表达 取 出DNA 用限制酶切断DNA 目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 方法1 方法2 将供体生物的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。 　　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。 用限制酶切成许多片断 方法1 方法2 逆转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。 直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 DNA合成仪 PCR扩增仪 返 回 提取质粒并用限制酶切割 用连接酶将目的基因和质粒连接 返 回 将目的基因导入受体细胞 将受体细胞进行扩增 返 回 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 下一页