质粒DNA的提取及电泳.pptVIP

分子生物学实验 当你翻开书本的时候，你必须尽可能地展开想象的“翅膀”，否则，你就不能走在别人的前面; 而当你进入实验室时，要象脱下你的外衣那样脱下你的想象力，因为实验操作中不能有一丁点儿的想象，否则，你对事物的观察就会受到影响。 实验相关知识 1、实验准备: 2、实验室安全与卫生 3、分组与实验操作 4、实验报告与成绩评定 实验一、质粒DNA的提取纯化 实验目的: 学习与掌握最常用的质粒DNA的提取与纯化方法 实验原理: 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。 DNA是具有一定结构的物质，一些特殊的环境会导致DNA变性，如加热、极端PH值、有机溶剂、尿素、酰胺试剂等，而适宜的环境又可以使DNA复性 SDS是一种阴离子表面活性剂，即可使细菌裂解，又可使蛋白变性，因此用SDS处理细菌会导致细菌细胞壁的破裂，从而使质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中释放出来。 释放出的DNA在强碱的作用下发生变性，再用酸性醋酸钾（KAc）缓冲液中和，质粒DNA迅速复性，而基因组DNA分子量太大不能复性。 离心后，质粒DNA在上清中，而基因组DNA与细胞碎片一起沉淀至离心管底部。 通过这种方法即可将质粒DNA从细菌中提取出来 试剂准备 溶液Ⅰ: 50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0）。1M T