课题3　血红蛋白的提取和分离.pptVIP

学生活动（一） 1.分离生物大分子的基本思路是什么？ 2.不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异？ 选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 一、基础知识： 基本原理：蛋白质各种特性的差异 如①分子的形状和大小、 ②所带电荷的性质和多少、 ③溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。（常用前3项） ㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）： 1、凝胶： 组成：多聚糖（如葡聚糖、琼脂糖） 形态：微小多孔的球体 结构:内含许多贯穿通道，也叫分子筛。 2、概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 相对分子质量较小 较长 较慢 相对分子质量较大 凝胶外部 较短 较快 大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 促使蛋白质分子的差速流动。 混合物 上 柱 洗 脱 大分子流动快 小分子流动慢 收 集 大分子 收 集 小分子 学生活动（二） 1.什么是缓冲液？ （ 举例说出人体 血 液中的缓冲液） 2.缓冲液的作用 是什么？ 3.如何配置缓冲 液？ ㈡ 缓冲溶液----洗脱剂 1、组成：弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。 2、缓冲溶液的配制： 调节缓冲剂的（ 使用比例）就可以制得（不同PH范围内）使用的缓冲液 。 3、作用：在一定的范围内，能抵制外来少量强酸、强碱对溶液PH的影响，维持PH基本不变 本课题使用的缓冲液是：磷酸缓冲液，保证血红蛋白正常结构和功能，便于观察红色,科学研究其活性。 原理：①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 ③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的方向和迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 ㈢ 电泳----蛋白质的分离和鉴定 定义：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 3.分类： 琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。 测定蛋白质相对分子质量通常用SDS—聚丙稀酰胺凝胶电泳。 SDS的作用：使电泳迁移率完全取决于分子的大小。 用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 A．路程较长，移动速度较慢 B．路程较长，移动速度较快 C．路程较短，移动速度较慢 D．路程较短，移动速度较快 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个 使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 作业： 预习第二课时实验操作的过程