专题二课题二土壤中分解尿素的细菌的分离和-计数教学课件.pptxVIP

尿素分子的立体结构CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3脲酶课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌一.研究思路㈠.筛选菌株㈡.统计菌落数目㈢.设置对照一、研究思路（一）筛选菌株启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。美国黄石国家公园的一个热泉水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus )——耐高温的Taq DNA聚合酶美国微生物学科布鲁克1966年发现耐热细菌一、研究思路（一）筛选菌株1、实验室微生物的筛选原理（P21） 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。一、研究思路（一）筛选菌株2、选择培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。加入青霉素的培养基 ——细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长不加含碳有机物的无碳培养基 ——分离自养型微生物阅读22页本课题使用的培养基配方 1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？碳源是葡萄糖，氮源是尿素2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。一、研究思路（二）微生物计数1、显微镜直接计数法1mm（二）微生物计数2、统计菌落数目——稀释涂布平板法平板菌落数统计注意事项1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个；2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数；3、菌落数目过多时，可以合理采用样方法。思考1：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按公式每mL样品中的菌株数=（C÷V）×M进行计算。恰当的稀释度、正确的涂布操作是成功地统计菌落数目的关键。某班级菌落数统计表格（取样0.1mL,稀释倍数106）组别第1组第2组第3组第4组151216519095256820717716235721781881024平均每mL样品中活菌数平板思考2：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？ 低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。思考3：为了增强实验结果的说服力和准确性，我们在实验设计时应该怎么做更合理？ 实例分析1想一想：哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？ 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中1个平板的计数结果与另外2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。实例分析2想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异 如此之大，请分析原因可能有哪些？①②实例分析2想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除 上述两个可能影响实验结果的因素吗？一种方案： 可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验。如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。实例分析想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除 上述两个可能影响实验结果的因素吗？另一种方案： 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 实例启示 实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的！设置对照实验的目的是什么？ 排除实验操作、培养条件等无关变量对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。一、研究思路（三）实验基本原则1、平行重复原则2、对照原则3、单一变量原则二、实验设计（对照原则、单一变量原则、平行重复原则）注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。思考题 分离不同的微生物能采用相同的稀释度吗？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 　答：不能。这是因为土壤中各类微生物的数量是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。微生物的培养与观察 关注菌